二甲双胍通过激活AMPK通路降低同型半胱氨酸对内皮细胞的损伤-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

摘 要 目的： 作为血管的保护伞，血管内皮细胞能使组织液和血液通过它完成物质代谢， 而且血管内皮细胞也能产生并分泌生物活性物质用来调节凝血与抗凝平衡及血 压等特殊功能，进而使血液流动正常和血管长期通畅。同型半胱氨酸能够使心 血管疾病的发病率升高，这跟它诱导血管内皮细胞的损伤有关。作为一种降糖 药物，二甲双胍被研究发现，可以使乳腺癌与心血管疾病的发病率降低，本实 验旨在探讨二甲双胍能否降低同型半胱氨酸对血管内皮细胞的损伤及其可能存 在的机制。 方法： ①观察不同溶度同型半胱氨酸（Hcy）作用血管内皮细胞后对细胞活性的影 响将实验分为正常组、Hcy 组，血管内皮细胞接种 24 小时后进行药物处理。Hcy 组分别用 250 μM、500 μM、1000 μM 及 2000 μM 溶度的 Hcy 处理细胞 24 小时； 用 CCK-8 试剂盒检测 Hcy 处理后的各组血管内皮细胞活性。 ②观察不同浓度二甲双胍（Metformin）作用血管内皮细胞后对细胞活性的 影响将实验分为正常组、Merformin 组，血管内皮细胞接种 24 小时后进行药物 处理。Merformin 组分别用 250 μM、500 μM、1000 μM 及 2000 μM 溶度的 Merformin 处理细胞 24 小时；用 CCK-8 试剂盒检测 Metformin 处理后的各组血 管内皮细胞活性。 ③构建 Hcy 的血管内皮细胞损伤模型探讨 Merformin 的干预作用及其机制 将实验分为正常组，Hcy 组，Merformin 组，Hcy+Merformin 组。细胞接种 24 小时后药物处理。Hcy 组加入 1000 μM 溶度的 Hcy，Merformin 组加入 1000 μM 溶度的 Merformin，Hcy+Merformin 组同时加入 1000 μM 溶度的 Hcy 及 1000 μM 溶度的 Merformin，然后共同作用 24 小时。对各组进行以下方面检测：CCK-8 检测各组血管内皮细胞活性，测定血管内皮细胞内乳酸脱氢酶（LDH）、总超氧 化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性和微量丙二醛（MDA） 水平，qRT-PCR 测定 NADPHmRNA、SODmRNA 及 CATmRNA 的表达，Western Blot 测定 p-AMPKα 及 t-AMPKα 蛋白的表达。 结果： II （1）血管内皮细胞活性 ①与正常组比较，各溶度 Hcy 组血管内皮细胞活性低(P0.05)，且随着 Hcy 浓度的增加，血管内皮细胞活性下降。 ②与正常组比较，各溶度 Merformin 组血管内皮细胞活性无明显变化 (P0.05)，且内皮细胞活性与 Merformin 浓度无关。 ③与正常组比较，Hcy 组细胞活性低(P0.05)，Merformin 组对细胞活性无 明显影响(P0.05)，而 Hcy+Merformin 组较 Hcy 组细胞活性高(P0.05)。 （2）乳酸脱氢酶(LDH)活性 与正常组比较，Hcy 组的细胞 LDH 活性高(P0.05)，Merformin 组的细胞 LDH 活性无明显差异(P0.05)，Hcy+Merformin 组 LDH 活性比 Hcy 组低(P0.05)， Merformin 能降低 Hcy 导致的 LDH 活性的升高。 （3）细胞内总 SOD 活性 与正常组比较，Hcy 组的细胞总 SOD 活性低(P0.05)，Merformin 组的细胞 总 SOD 活性无明显差异(P0.05)。Hcy+Merformin 组总 SOD 活性比 Hcy 组高 (P0.05)，Merformin 能缓和 Hcy 导致的总 SOD 活性的降低。 （4）丙二醛(MDA)的生成水平 与正常组比较，Hcy 组细胞 MDA 的生成水平高(P0.05)，Merformin 组的细 胞 MDA 的生成水平无明显差异(P0.05)。Hcy+Merformin 组细胞 MDA 的生成 水平生成水平比 Hcy 组低(P0.05)，Merformin 能降低 Hcy 导致的细胞 MDA 的 增加。 （5）谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性 与正常组比较，Hcy 组的谷胱甘肽过氧化物酶活性低(P0.05)，Merformin 组的细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性无明显差异(P0.05)。Hcy+Merformin 组谷胱 甘肽过氧化物酶活性比 Hcy 组高(P0.05)，Merformin 能缓和 Hcy 导致的谷胱甘 肽过氧化物酶活性的降低。 （6）NADPHmRNA 的表达量 与正常组比较， Hcy 组的细胞 NADPHmRNA 的表达量高 (P0.05) ， Hcy+Merformin 组细胞 NADPHmRNA 的