二苯乙烯苷对H2O2诱导内皮细胞凋亡的作用研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

英文缩写词索引 缩略语 AS 英文全称 atherosclerosis 中文译名 动脉粥样硬化 bp base pair 碱基对 cDNA complementary DNA 互补脱氧核糖核酸 HUVEC human umbilical vein endothelial cell 人脐静脉内皮细胞 MTT methylthiazoletrazolium 四噻唑蓝 PBS phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 PARP PMSF poly ADP-ribose polymerase phenylmethylsulfonyl fluoridei 聚（ADP-核糖）聚合酶 苯甲基磺酰氟 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 ROS reactive oxygen species 活性氧簇 rpm revolutions per minute 每分钟转速 RT-PCR reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链反应 TSG 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside 二苯乙烯苷 二苯乙烯苷对 H2O2 诱导内皮细胞凋亡的作用研究 研究生：黄良珠 导 师：龙石银 副教授 田 英 教 授 中文摘要 目 的：研究二苯乙烯苷（TSG）对 H2O2 诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用，初步 探讨 TSG 抗内皮细胞凋亡的作用机制。 方 法：体外培养人脐静脉内皮细胞，以不同浓度的 H2O2 及 TSG 作用内皮细胞。采 用 MTT 检测细胞活力、Hoechst33258 染色观察细胞形态、流式细胞术检测细胞凋亡 率，筛选造模内皮细胞凋亡的 H2O2 浓度及最佳 TSG 浓度。RT-PCR 检测 PARP、 Caspase-3 mRNA 的表达和 Western-blotting 检测 Bcl-2、Bax、PARP、Caspase-3 蛋白 的表达。 结 果：与空白对照组比，以 100～500μmol/L H2O2 作用内皮细胞后，随着 H2O2 浓 度增加，细胞增殖率逐渐降低，除 100μmol/L H2O2 外，差异均有显著性，P0.01； Hoechst33258 染色后可见 300μmol/LH2O2 组中有大量凋亡细胞；流式细胞术结果显 示：空白对照组凋亡率为 1.9±0.01%，随着 H2O2 浓度增加，细胞凋亡率逐渐增加， 凋亡率分别为：6.3±0.03%、14.9±0.2%、25.3±0.3%、28.8±0.6%、33.0±1.1%。经 TSG 预处理后，随着 TSG 浓度增加，细胞增殖率逐渐增加，与 H2O2 组相比，10、100μmol/L TSG 组细胞活力增加，差异有统计学意义（P0.05）；Hoechst33258 染色后可见 10、 100μmol/L TSG 组凋亡数量明显减少；流式细胞术结果显示：TSG 组细胞凋亡率均降 低，凋亡率分别为：18.3±2.60%、16.2±1.96%、15.0±2.35%、12.4±1.37%，除 1 μmol/LTSG 外，其余几组均有统计学差异（P0.05）；RT-PCR 和 Western-blotting 结果显示：H2O2 组 Caspase-3、PARP 的 mRNA 和蛋白水平表达均增加、Bax 蛋白的表达增加，而 Bcl-2 蛋白表达降低，且 Bcl-2/Bax 的比值降低。经 TSG 预处理后，Caspase-3、PARP 和 Bax 的表达均降低，Bcl-2 蛋白的表达增加，且 Bcl-2/Bax 的比值升高，差异有统计 学意义（P0.01）。 结 论：TSG 能抗 H2O2 诱导的内皮细胞凋亡，其作用机制可能通过下调 Caspase-3、 PARP、Bax 的表达和提高 Bcl-2 的表达有关。 关键词：人脐静脉内皮细胞；二苯乙烯苷；细胞凋亡；PARP；Caspase-3；Bcl-2； Bax Effect of 2, 3, 5, 4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D- glucoside on apoptosis of endothelial cells induced by H2O2 Abstract Aim: To observe the cytoprotection effects and molecular mechanisms of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside on the apoptosis of human vein endothelial cell induced by H2O2. Methods