从“湿热变证”论治急性肝损伤的动物实验研究及机制初探-中西医结合临床专业论文.docxVIP

目的： 中 文 摘 要 在中医理论指导下，试探性地寻找适合相应中医治法的造模方式。从中医药 防治湿热变证的方法入手，对急性肝损伤进行防治。分别观察两种不同的治疗湿 热变证的中医治法对两种不同类型的急性肝损伤动物模型的疗效，并初步探讨其 保肝作用机制。特别研究中药复方对肝细胞胀亡的影响，拓宽对中药保肝机制的 研究，期望为中医药防治急性肝损伤提供更多新的理论依据和有效方药。 方法： 根据湿热病邪导致的中医不同证型：湿热之邪从热化或湿热之邪从寒化， 分别选择相应方药，选择适合该证型的造模方法，对其疗效及作用机制进行探讨。 针对湿热之邪从热化，选用具有和解少阳、清热祛湿、滋阴活血的中药复方柴胡 愈肝汤方进行研究，观察其对 D- Gal 造成的化学性急性肝损伤大鼠的影响。对于 湿热之邪从寒化，选用具有补火助阳，散寒止痛的单味中药附子振奋阳气，温化 寒湿，观察其对卡介苗（BCG）/ 脂多糖（LPS）造成的免疫性急性肝损伤大鼠模 型的影响。 1. 柴胡愈肝汤方治疗 D- Gal n 所致大鼠急性肝损伤：SD 大鼠, 雌性, 60 只， 随机分为空白对照组、模型组、联苯双酯组、中药低、中、高剂量组，每组 10 只。除空白对照组外，一次性腹腔注射 D- Gal n600mg/ kg 以造成肝损伤模型，造 模后立即给予药物灌胃治疗, 每日两次，其中联苯双酯组的日给药量为 4. 5mg/ kg, 中药低中高剂量组的日给药量分别为：11. 8g/ kg、23. 6g/ kg 和 47 g/ kg。 造模 48h 后，所有大鼠股动脉采血，取血浆测 ALT、AST、TB、Cal pai n、TNF- α、 I L- 18。处死动物，取肝右叶作常规 HE 切片，透射电镜下观察肝细胞形态结构。 免疫组化法检测肝组织中 bcl - 2、bax 的表达。 2. 附子防治 BCG/ LPS 所致大鼠急性肝损伤：将 50 只 SD 大鼠随机分为 5 组： 正常组 10 只，模型组 10 只（采用卡介苗联合脂多糖法建立免疫性肝损伤的大鼠 模型），低、中、高剂量治疗组各 10 只（治疗组采用附片免煎剂进行干预）。造 模成功后 24h 取大鼠血清观察 ALT、AST、TBI L、MDA、SOD 的改变情况，取肝组 织进行病理组织学检查，用核磁共振法对肝组织中的小分子代谢产物进行检测。 结果： 1. 柴胡愈肝汤方对 D- Gal n 所致大鼠急性肝损伤的治疗作用： ( 1) 造模后 48h，模型组血浆中 ALT、AST、TB 含量明显升高，与正常组相比 差异有统计学意义（P＜0. 05）。DDB 组、柴胡愈肝汤方低、高剂量治疗组、阳性 对照组血浆中 ALT、AST、TB 含量与模型组相比均降低，差异有统计学意义（P ＜0. 05）；中剂量组血浆中 ALT、TB 下降，与模型组相比有统计学意义（P＜0. 05）。 ( 2) 造模后48h，模型组血浆Cal pai n、TNF- α、I L- 18表达明显增高，差异显 著（P＜0. 05）。与模型组相比，DDB组、低剂量治疗组血浆TNF- α、Cal pai n、I L- 18 表达明显降低，中剂量组血浆TNF- α表达降低，高剂量组血浆TNF- α、Cal pai n 表达降低，差异均具有统计学意义（P＜0. 05）。中剂量组对血浆Cal pai n、I L- 18 影响不显著（P＞0. 05），高剂量组对血浆I L- 18影响不显著（P＞0. 05）。 （3）模型组肝组织bcl - 2表达明显下降，bax表达明显增高，与正常组相比差 异有统计学意义（P＜0. 05）。与模型组相比，DDB组、柴胡愈肝汤低、高剂量组 均能有效降低造模后肝组织中bax表达，增强肝组织中bcl - 2的表达，有明显差异 （P＜0. 05）。中剂量组对肝组织中bax、bcl - 2表达水平的影响不显著（P＞0. 05）。 （4）肝组织HE染色检测结果显示：模型组脂肪样变、空泡样变明显，并存在 散在的点灶状坏死，治疗组脂变、空泡样变程度及面积均较模型组减轻，其中柴 胡愈肝汤高剂组和DDB组病变最轻，低剂组病变次之，中剂量组变性程度与模型 组差别不明显。 （5）肝组织电镜结果表明：模型组肝细胞同时出现胀亡、凋亡两种不同的死 亡形态，明显可见肝细胞内线粒体肿胀、破损，嵴退化或消失，内质网扩张或崩 解。高剂组和DDB组肝细胞坏死程度较轻，肝细胞内线粒体肿胀不明显。中剂量 组与模型组相比病变改善程度不明显。 2. 附子对BCG/ LPS所致大鼠急性肝损伤的保护作用： ( 1) 各用药组均能明显降低BCG/ LPS所致免疫性肝损伤大鼠血清的ALT、AST、 TBI L、MDA，与模型组比较有显著性差异（