多重耐药鲍曼不动杆菌关键耐药基因的分析-病原生物学专业论文.docxVIP

多重耐药鲍曼不动杆菌关键耐药基因的研究 中文摘要 目的：了解皖北地区3家教学医院临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药情 况，探讨其关键耐药分子机制：β-内酰胺水解酶及主动外排机制，为临床抗菌药物 治疗提供合理的指导和参考。 方法：收集皖北地区 3 家教学医院 2010 年 3 月至 2012 年 3 月多重耐药鲍曼 不动杆菌无重复分离株共 43 株，采用全自动细菌鉴定与药敏分析仪对收集菌株进 行种属鉴定并测定其对 15 种抗菌药物的敏感性，采用 PCR 方法对关键的β-内酰胺 酶基因（包括 TEM、IMP、VIM、OXA-23、ISAba1-OXA-23）和外排泵基因 AdeB 进行了筛选，并对扩增产物进行测序分析；采用逆转录 PCR（RT-PCR）检测 AdeB 基因的 mRNA 表达水平，分析其表达与细菌耐药性之间的关系。 结果： 1. 43 株非重复鲍曼不动杆菌病室来源以重症监护室最多（26 株），其余为呼 吸内科（5 株）、神经外科（3 株）、神经内科（2 株）、烧伤整形科（2 株）， 剩余 5 株来源于其他科室。标本来源分布情况：36 株（83.7%）来源于痰液，4 株 来源于分泌物，其余 3 株分别来源于血液、脑脊液和尿液。 2. 15 种抗菌药物中，临床常用药物（阿米卡星、环丙沙星、庆大霉素、头孢 曲松、左氧氟沙星等）的耐药率均达到 95%以上，碳青霉烯类抗生素（亚胺培南、 美罗培南）有较高的耐药率，均为 81.4%，头孢哌酮舒巴坦耐药率为 69.8%，多粘 菌素 E 耐药率为 7.0%，替加环素为 4.7%，利福平为 16.3%。 3. 耐药基因检测：43 株多耐药鲍曼不动杆菌中 TEM 阳性株数 41 株，阳性率 %；35 株碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌中 IMP、VIM、OXA-23、ISAba1-OXA-23 的阳性株数分别为 20 株、1 株、29 株、25 株，阳性率分别为 57.1%、2.9％、82.9%、 71.4%，29 株 OXA-23 基因中 25 株上游检测到插入序列 ISAba1，ISAba1-OXA-23 经测序比对，与 Genbank 上的该序列同源性为 100%。 4. 外排基因 AdeB 基因检测均为阳性，逆转录 PCR（RT-PCR）方法检测 AdeB 基因表达水平结果：碳青霉烯耐药组和碳青霉烯相对敏感组菌株 AdeB/GAPDH 计 算结果分别为（2.13±0.35）和（0.92±0.16），差异有统计学意义（P0.05）。碳 - - 1 - - 青霉烯类抗生素耐药组的 AdeB 基因 mRNA 水平高于相对敏感组（P0.05）。 结论： 1. 皖北地区 3 家教学医院的临床分离的鲍曼不动杆菌耐药情况较为严重，是 值得关注的医院感染病原菌，其中以 ICU 临床分离率最高，呼吸系统感染更为常 见。本地不动杆菌对多粘菌素、替加环素等耐药率仍较低，可作为临床治疗备选 药物。 2. 本地鲍曼不动杆菌检测出β-内酰胺类药物水解酶主要包括：超广谱 β-内酰 胺酶 blaTEM、金属酶 blaVIM 和 blaIMP 以及碳青霉烯酶 blaOXA-23。 3. 本地鲍曼不动杆菌携带的 blaOXA-23 碳青霉烯酶基因序列上游普遍含有插 入序列 ISAba1，其比例为 86.2%。 4. 主动外排基因 AdeB 的 mRNA 转录水平与碳青霉烯类耐药关系密切。 关键词：鲍曼不动杆菌；耐药性；β-内酰胺酶；外排泵；逆转录聚合酶链反应 A study on the key resistance genes in Multidrug-resistant Acinetobacter baumannii Abstract OBJECTIVE: To investigate the susceptibility to clinical commonly used antimicrobials of Acinetobacter baumannii isolates, which isolated from three teaching hospitals in North Anhui province, and to explore the key molecular mechanism concerning multidrug resistance, such as β-lactamases and active efflux pump, and aim to provide fundamental susceptibility information and clinical practice references for the use of antimicrobial agents. METHOD: