促红细胞生成素对阿霉素致大鼠膈肌损伤的保护作用-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

中文摘要 目的：探讨阿霉素对大鼠膈肌的损伤机制及促红细胞生成素（erythropoietin，EPO） 对阿霉素( doxorubicin, DOX )致大鼠膈肌损伤的作用。 方法：雄性 SD 大鼠 50 只，随机分为对照组、DOX 组、EPO+DOX 组、EPO 组。 给药方法 ：对照组 10 只：腹腔注射 NS ；DOX 组 15 只：大鼠腹腔先注射 NS， 之后 0.5 h 注射 DOX，每次 2.5 mg/kg，每周 3 次，连续 2 周，共 6 次，总量 15 mg/kg； EPO+DOX 组 15 只:大鼠腹腔先注射 EPO，每次 2 500 U/kg，每周 3 次，连续 2 周， 共 6 次，每次 EPO 注射之后 0.5 h 注射 DOX，每周 3 次，连续 2 周，共 6 次；EPO 组 10 只：大鼠腹腔注射 EPO，每次 2 500 U/kg，每周 3 次，连续 2 周，共 6 次， 总量 15000 U/kg。经过 2 周，麻醉后行气管插管，记录呼吸功能参数：呼吸频率 （RF）、潮气量（TV）、肺通气量（PV）、最大肺通气量（MVV）；动脉血气 分析：检测二氧化碳分压（PaCO2）、氧分压（PaO2）、氧饱和度(SaO2)及 pH 值； 应用离体大鼠膈肌肌条方法，分别测量其单收缩张力（Pt）、最大强直张力（Po）、 峰值收缩时间(CT)、半舒张时间(1/2RT)、张力最大上升速率(+dT/dtmax）、张力最 大下降速率(-dT/dtmax)、张力-频率曲线(Force-frequency curve)及疲劳指数(FI)的变 化，同时测定膈肌组织超氧化物歧化酶（SOD)活力和丙二醛(MDA)的含量。应用 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测膈肌组织中肌浆网钙泵（SERCA）、磷酸受 钠蛋白(PLB)、Bax、Bcl-2 基因表达的变化；并用光镜和电镜观察膈肌组织的形态 和超微结构的变化。 结果：（1）与对照组比较，DOX 组大鼠呼吸频率、潮气量、肺通气量、最大肺通 气量均明显低于正常对照组（P﹤0.01），EPO+DOX 组比 DOX 组明显提高（P﹤ 0.01）。DOX 组大鼠膈肌 Pt、Po、+dT/dtmax、-dT/dtmax 明显低于对照组（P﹤0.01）， EPO+DOX 组 Pt、Po、+dT/dtmax、-dT/dtmax 高于 DOX 组（P﹤0.01），EPO 组大鼠 膈肌的 Pt、Po、+dT/dtmax、-dT/dtmax 与对照组比较差异无统计学意义。DOX 组的 CT、1/2RT 明显长于对照组及 EPO 组（P﹤0.01）。予 10、20、40、60、100 Hz 频率的方波电压刺激膈肌时，DOX 组大鼠膈肌张力明显低于正常对照组和 EPO 组 （P﹤0.01）。（2）与对照组比较，DOX 组大鼠膈肌组织的 SOD 活力明显降低， MDA 含量明显升高（P﹤0.01），EPO+DOX 组的 SOD 活力明显提高（P﹤0.01）， MDA 含量明显降低（P﹤0.01）。EPO 组与对照组比较差异无统计学意义。(3)光 镜下，DOX 组大鼠膈肌肌纤维紊乱、萎缩甚至断裂；电镜显示阿霉素导致膈肌细 胞肌纤维肿胀，线粒体空泡化。(4)RT-PCR 研究显示：与 DOX 组比较，EPO+DOX 组的 SERCA mRNA 表达显著提高(P﹤0.01)，PLB mRNA 表达显著降低(P﹤0.01)。 与对照组相比较，DOX 组的 Bax mRNA 表达水平明显增高(P﹤0.01) ，Bcl-2 mRNA 表达水平明显降低(P﹤0.01)，Bcl-2/Bax 比值显著降低(P﹤0.01)；而与 DOX 组相 比较，EPO+DOX 组的 Bcl-2 mRNA 表达增高，Bax mRNA 表达无统计学差异， Bcl-2/Bax 比值显著增高(P﹤0.01)。 结论：阿霉素导致大鼠膈肌收缩和舒张功能减低，脂质过氧化、细胞内钙超载和 膈肌细胞凋亡增加，其机理可能与 SERCA、Bcl-2 mRNA 表达减少和 Bax、PLB mRNA 表达增多有关。EPO 可通过降低脂质过氧化、减轻细胞内钙超载和抑制膈 肌细胞凋亡对 DOX 中毒大鼠膈肌发挥保护作用，这一作用可能与上调 SERCA mRNA 表达、Bcl-2/Bax 比值和下调 PLB mRNA 表达有关.。 关键词：阿霉素；促红细胞生成素；膈肌；自由基；SERCA; PLB；Bax；Bcl-2 Abstract Objective: To explore the mechanism of doxorubicin (DOX) induced diaphragmatic toxicity in rats and investigate th