猪ESRRB启动子克隆及其调控活性检测.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 杨藩 等/猪ESRRB 启动子克隆及其调控活性检测 491 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn April 25, 2015, 31(4): 491−500 DOI: 10.13345/j.cjb.140368 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 动物及兽医生物技术 ESRRB 1 1 2 1 杨藩 ，王亚娴 ，杜丽霞 ，王华岩 1 712100 2 712100 , , , . ESRRB . , 2015, 31(4): 491–500. Yang F, Wang YX, Du LX, et al. Cloning and regulation of pig estrogen related receptor β gene (ESRRB) promoter. Chin J Biotech, 2015, 31(4): 491–500. 摘 要: Esrrb (Estrogen related receptor β) 属于雌激素受体家族，是一类在胚胎早期外胚层细胞中表达并对干 细胞多能性维持起重要作用的基因。为了探索猪ESRRB 的表达和转录调控机制，克隆了3.3 kb ESRRB 启动子 片段，构建了相应的报告载体。并将报告载体分别转染 293T 人胚肾细胞、Hela 人宫颈癌细胞和小鼠 C2C12 成肌细胞。通过TFSEARCH 和JASPER 方法对ESRRB 启动子潜在的转录调控位点进行分析，发现该启动子上 有 SMAD、STAT3、MYC 、KLF4 等多能转录因子的结合位点。将相应的转录因子与ESRRB 启动子共转染， 并检测报告基因荧光素酶的活性。结果显示猪ESRRB 启动子具有明显的组织特异性调控，同时SMAD 对ESRRB 启动子活性有较明显的调控作用。进一步对3.3 kb 片段进行了一系列的缺失，发现猪ESRRB 核心区域位于5′上游 的−25 bp 和−269 bp 之间。研究结果表明猪ESRRB 启动子上潜在的转录因子结合位点及启动子核心区域是参 与调控ESRRB 表达的重要序列。 : 猪，雌激素相关受体，启动子，多能干细胞，转录调控 Received: July 14, 2014; Accepted: October 27, 2014 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No., National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2011CBA01002). Corresponding author: Huayan Wang. Tel: +86-29 E-mail: hhwang101@163.com (No., (973 ) (No. 2011CBA01002) 492 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech April 25, 2015 Vol.31 No.4 Cloning and regulation of pig estrogen related receptor β gene (ESRRB) promoter 1 1 2 1 Fan Yang , Yaxian Wang , Lixia Du , and Huayan Wang 1 Shaanxi Center for Stem Cell Engineering and Technolog