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IPTGyou导原理.ppt 34页

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乳糖操纵子的诱导原理 中心法则(the central dogma) 基因的表达方式 根据生物对内外环境刺激的反应,将基因表达的方式分为: 组成型表达 诱导和阻遏表达 组成型表达 (constitutive?gene?expression) 在个体发育的任一阶段都能在大多数细胞中持续进行的基因表达,无论表达的水平高或低,它受环境因素的影响较少、或变化很小。 且基因表达产物通常是对生命过程必需的、必不可少的,这类基因通常被称为持家基因(housekeeping?gene)。 诱导和阻遏表达 诱导(induction):在特定的环境信号刺激下,相应基因被激活,从而使基因的表达产物增加。这类基因称为可诱导基因。 可诱导基因在特定环境中表达增强的过程,称为诱导 (induction)。 乳糖 → 利用乳糖的三种酶表达 阻遏(repression):在特定环境信号刺激下,相应基因被抑制,从而使基因的表达产物减少。这类基因称为可阻遏基因。 可阻遏基因表达产物水平降低的过程称为阻遏 (repression)。 协调表达 (coordinate expression) 在一定机制控制下,功能上相关的一组基因,无论其为何种表达方式,均需协调一致、共同表达,使各表达产物的分子比例适当,从而正常发挥功能。这种现象称为协调表达 (coordinate expression),这种调节称为协调调节 (coordinate regulation)。 乳糖操纵子的结构和功能 操纵子模型的提出 1960-1961年,莫洛(Monod)和雅各布(Jacob)首次提出“操纵子”学说。 获1965年诺贝尔生理学和医学奖 1940年, Monod发现:细菌在含葡萄糖和乳糖的培养基上生长时,细菌先利用葡萄糖,葡萄糖用完后,才利用乳糖;在糖源转变期,细菌的生长会出现停顿。即产生“二次生长曲线”。 操纵子(operon):很多功能相关的结构基因串联排列在染色体上,由一个共同的控制区来操纵这些基因的表达,包含这些结构基因和控制区的整个核苷酸序列就称为操纵子。 操纵子的组成: ----结构基因(structural gene, SG) :操纵元中被调控的编码蛋白质的基因 ----启动子(promoter,P):是指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。 ----操纵基因(operator,O):是指能被调控蛋白特异性结合的一段DNA序列。 阻遏物基因(inhibitor,I),产生阻遏物(repressor)。 三个特异性序列: 操纵序列 O (operator): 阻遏蛋白结合位点。 启动子 P (promoter): 位于结构基因的上游。 CAP结合位点:环cAMP受体蛋白(分解代谢物激活蛋白)结合位点。 一个调节基因 lac I:编码阻遏蛋白,能结合于操纵序列位点。 当一个mRNA含有编码一个以上蛋白质的编码信息,而且这些蛋白质都是以独立的多肽被翻译时,这样的mRNA称之多顺反子mRNA。 多顺反子mRNA在细菌中是很普遍的。 多顺反子lac mRNA中的lacZ,lacY,lacA经翻译生成的产物分别生成代谢分解乳糖的三种酶 始终存在着一定的比例关系( Z : Y : A = 5 : 2 : 1 ) lacZ、Y、A基因的转录是由lacI基因指令合成的阻遏蛋白R所控制。lacI一般和结构基因相毗连,但它本身具有自己的启动子和终止子,成为独立的转录单位。 由于lacI的产物是可溶性蛋白,按照理说是无需位于结构基因的附近。它是能够分散到各处或结合到分散的DNA位点上。 阻遏蛋白的负调控 (negative control of repressor) 阻遏蛋白的负调节(negative control of repressor) 无乳糖(no lactose): lac操纵元处于阻遏状态(repression) 有乳糖(presence of lactose):lac操纵元即可被诱导(derepression,induction) 诱导剂(inducer): 别乳糖、半乳糖、IPTG(异丙基硫代半乳糖苷) The Lac Operon: When Glucose Is Present But Not Lactose The Lac Operon: When Lactose Is Present But Not G

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