脓汁和粪便标本中病原菌的检测-2教学材料.pptVIP

器材准备 浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒棉球1瓶，酒精棉球 1瓶，眼科镊子2把；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板5个。 空气的细菌学检查 空气是人类赖以生存的环境之一，也是重要的疾病传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶胶的形式悬浮于空中，使空气受到污染。 环境：不利于微生物生长。 种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致病菌的数量比较多。 作用：可迅速全球传播。 危害：引起培养基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道传染病。 实验方法(自然沉降法):根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位（ colony forming unit ，CFU），可了解空气的污染情况。 实验步骤：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边，平板暴露于空气中15分钟，然后平板倒扣盖上，作标记。37℃温箱培养24小时，观察结果。 ※ CFU/m3 ＝ 50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。 N：平板上的菌落数。 A：平板面积(平方厘米)。 T：采样时间(分钟)。 平板盖打开，盖朝下放在平板旁边，平板暴露15分钟。 空气的细菌学检查 暴露法（Exposure Method) 组号 采样地点 采样时间(min) 菌落形成单位(CFU) 1 实验室 15 2 卫生间 15 3 门诊大厅 15 4 呼吸科走廊 15 5 呼吸科病房 15 6 呼吸科ICU 15 7 外科走廊 15 8 外科病房 15 9 外科ICU 15 10 外科治疗室 15 手指皮肤的细菌学检查P41 在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受到污染的机会也最多。一只外观比较“干净 ”的手，可携带10万个细菌、200多种病毒。经手传播的疾病，包括肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手传播的疾病。 常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法，常不易去除。 暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通常是暂住菌。 常规的洗手方法（甲和丙操作） 将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。 反复搓揉双手，搓揉时间不少于 30秒。 用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。 ※能有效地去除大多数暂住菌。 医学微生物学教学实验室标准洗手方法（乙和丁操作） 用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。 分别搓擦10～15次。 保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。 1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦 4.两手互握互搓指背 5.拇指在掌中转动搓擦 6.指尖在掌心中搓擦 手指皮肤的细菌学检查 甲和乙、丙和丁共用1个平板 上:甲、丙→常规洗手 下:乙、丁→标准洗手 第1格为洗手前， 第2格为洗手后， 第3格为消毒后， 第4格空白对照。 在培养基表面触摸2～3厘米 甲（丙） 乙（丁） 1 2 3 4 脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验流程(6次课12学时） ①培养基的制备 ②细菌的分离培养 ③细菌的纯培养 ④细菌的形态学检查 ⑤细菌的生化试验等 ⑥细菌的血清学试验、结果分析→实验论文撰写 平板划线分离法 Streak Plate Method 借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。 Colony:在固体培养基表面或基内，由单个细菌在局部位置不断增值，形成肉眼可见的细菌集团，称为单菌落。 Colony Forming Units:由单个或聚集成团的多个菌体，在固体培养基上生长繁殖堆积形成肉眼可见的细菌集落，称为菌落形成单位。 Lawn:在固体培养基表面，由许多菌落融合在一起形成一片密集的的细菌群落,称为菌苔 。 方法:见下一张幻灯片。 充分利用平板面积，不能划破琼脂。 划线示意图 分离结果 ①接种环烧灼灭菌。 ②取标本3～6ul。 ③平板采光，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。 ④接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。 ⑤烧掉接种环上多余的标本。 ⑥转动平板，通过第一区5～7次，使接种环重新沾上少量细菌，同样的方法划第二区。 ⑦转动平板，接种环通