色谱概论和经典液相色谱法二教程教案.ppt

色谱分析 -----研究生 主讲: 赵怀清;第二节 色谱法的分类与历史;二、分类：;续前;3．按分离机制分：;图示; 第二章 色谱基本理论;续前;;3．色谱峰　是流出曲线上的突起部分。 正常色谱峰为对称形正态分布曲线。 不正常色谱峰有两种：拖尾峰和前延峰。 色谱峰的对称与否可用对称因子fs (symmetry factor) ，或叫拖尾因子(tailing factor)，来衡量。 ;对称因子在0.95～1.05之间的色谱峰为对称峰； 小于0.95者为前延峰。 大于1.05者为拖尾峰。 ;;二、定性参数;;3．调整保留时间 (adjusted retention time； ) ;5．死体积 (dead volume；V0) ;6．调整保留体积(adjusted retention volume；) 与流动相流速无关 7．相对保留值(relative retention；r)　 ;8．保留指数(retention index；I) 又称Kovats指数，定义式如下： ; 规定正己烷、正庚烷、正辛烷的保留指数分别为600、700、800，依次类推。 同系物中，每增加1个CH2，保留指数增加100。 例如 在阿皮松柱上，测定某样品的保留指数，测得数据如下：; tR t0 样品 乙酸正丁酯 340s 30s 物质对 正庚烷(Z) 204s 正辛烷 (Z+n) 403.4s ;三、柱效参数;;2．半峰宽 (peak width at half height；W1/2) 是峰高一半处的峰宽。 W1/2=2.355σ 3．峰宽 (peak width；W) 是通过色谱峰两侧拐点作切线在基线上所截得的距离。 W=4σ 或 W=1.699W1/2 ;（二）理论塔板数和理论塔板高度;;2. 理论塔板高度;四、分离参数;2.基本分离方程式;a项取决于柱效，n↑，a项↑ b、c项相关 在GC中： b项主要受色谱柱性质影响 c项主要受柱温影响 在HPLC中： b项主要取决于流动相的种类 c项主要取决于流动相的配比;（2）薄层色谱：;（二）有效峰数（effective peak number,ENP);例如：在一个20m0.24mm内径的WCOT柱，固定液为Carbowax 20M，柱温80℃，测定正构醇同系物得：正戊醇、正己醇和正庚醇的保留时间分别为：554.0，870.6和1459.2s，色谱峰宽分别为：7.54，12.03和20.40s。 用正戊醇、正己醇的数据计算ENP;（三）分离值;例1 若RZ+1/Z=6，R*＝1.5，则SV=3. 说明在含有Z与Z+1个碳的同系物的色谱峰间能容纳3个色谱峰。 例2 若RZ+1/Z=6，R*＝1.0，则SV=5. 说明在含有Z与Z+1个碳的同系物的色谱峰间能容纳5个色谱峰。;;2.在薄层色谱法中的定义和含义;例1 若Rf=0及Rf＝1两组分斑点分离度R=6，两相邻组分斑点的R*=1.5,则：;例2 若Rf=0及Rf＝1两组分斑点分离度R=6，两相邻组分斑点的R*=1.0,则：;SV的数值取决于R和R*，无统一规定，所以不便于比较，所以，常用分离数（SN或TZ）衡量色谱柱和薄层的分离性能。;（四）分离数（separation number,SN; Trennzahl,TZ);;将分离度公式代入上式：;分离数的含义：;计算结果表明，该WCOT柱在正戊醇与正己醇间可容纳相邻峰分离度为1.177得色谱峰26.5个。;2.在薄层色谱法中的定义和含义;在薄层色谱法中，计算Rf=0及Rf=1两组分斑点的分离度时，可用下式：;SN的含义：;计算结果表明，在Rf=1及Rf=0的组分的斑点间，可容纳相邻斑点的分离度（R*)为1.5得斑点9.5个。;五、相平衡参数; 分配系数与组分浓度大小无关，其色谱峰呈正态分布------线性色谱。 非线性色谱体系的K不是常数，K随浓度而变化。 分配系数由组分和固定相的热力学性质决定，随柱温而变化，与两相体积无关。 在液相色谱法中，还决定于流动相的性质。;2.分配系数与柱温的关系;3．容量因子(capacity factor；k) 组分在固定相和流动相中的质