2018-2019高中生物第1章微生物技术1.2微生物的纯培养课件北师大版.pptxVIP

第2节　微生物的纯培养1.阐明接种方法。2.进行微生物的分离和培养。一二一、纯培养人们要研究某种微生物的特性,就要从混杂的样品中取得所需的纯种,或者把受污染的菌种重新分离出来,使该微生物处于纯培养状态。也就是说,培养物中所有细胞只是微生物的某一个种或株,它们有着共同的来源,是同一细胞的后代。一二二、微生物的分离与纯化1.基本思路一般根据微生物对营养物质、pH、氧气等条件的要求不同,供给它们适宜的生活条件,或加入某种抑制剂,造成只利于要分离的微生物生长、不利于其他微生物生长的环境,从而淘汰不需要的微生物,分离得到需要的微生物纯种。2.原理将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上,样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上,经培养后,即可得到一个微生物的纯种。3.分离步骤微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。一二4.接种方法划线或涂布过程包括平板划线分离法和涂布分离法。常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。1.平板划线分离法的操作要点(1)在操作第一步、每次划线之前及划线操作结束时都要灼烧接种环。操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到单个菌落;划线结束后灼烧接种环能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境或感染操作者。(2)在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线,以免接种环温度太高,杀死菌种。(3)在进行第二次以及其后的划线操作时,要从上一次划线的末端开始划线。划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.涂布分离法的操作要点(1)稀释操作时,注意每次都要使菌液与水充分混匀。操作时,试管口和移液管应在距离火焰1~2 cm处。(2)涂布平板时的所有操作都应在火焰附近进行,同时酒精灯与培养皿的距离要合适,吸管头不要接触任何其他物体等。(3)涂布时可转动培养皿,使涂布均匀。(4)无菌玻璃涂棒末端浸在盛有体积分数为70%酒精的烧杯中,取出时,要让多余的酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的玻璃涂棒在酒精灯火焰上引燃以灭菌,同时要注意防火。平板划线分离法与涂布分离法各有优点,二者的目的都是分离得到单个菌落。平板划线分离法方法简单,涂布分离法单菌落更易分开,但操作复杂些。3.对分离纯化效果的判断方法(1)培养时,要将接种后的培养基和一个未接种的培养基一同培养。未接种的培养基的作用是对照,若其表面有菌落形成,说明培养基灭菌不彻底,需要重新进行实验。(2)如果对照培养基上无菌落形成,可观察接种后的培养基。如果培养基上大肠杆菌菌落呈白色,为圆形,光滑且有光泽,边缘整齐,则说明接种成功;如果出现了其他颜色、形状的菌落,说明有杂菌,需要重新进行分离纯化。规律总结培养时间不同,菌落大小会不同,因为时间越长,菌落中细菌繁殖越多,菌落体积越大;培养时间越长,菌落数可能会增多,但已有的菌落分布位置应相同。题型一题型二接种操作的注意事项【例题1】 下列有关平板划线操作的叙述,不正确的是 (　)A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B.每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上的菌种C.在第二区域内划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液D.划线结束后,灼烧接种环,能及时杀死接种环上的菌种,避免细菌污染环境或感染操作者解析:在第二区域内划线时,接种环上的菌种来源于第一次划线的末端。答案:C题型一题型二对特定微生物的分离纯化【例题2】 有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。请回答下列问题。(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以　为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲,该培养基属于　培养基。?(2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即　和　。?(3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力　。?题型一题型二(4)通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有火焰灭菌、　和　。无菌技术要求实验操作应在酒精灯　附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。?题型一题型二解析:(1)要获得分解原油的细菌,应选择以原油为唯一碳源的培养基,以保证这种细菌可以大量繁殖,而其他细菌不能生存。此种培养基属于选择培养基。(2)纯化菌种常用平板划线分离法和涂布分离法。(3)在以原油为唯一碳源的培养基上,菌落周围的原油被分解而形成分解圈