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基因工程抗体1整理版.ppt
the leader in enzyme technology PhDTM Phage Display System 用于 PhD 中的噬菌体是 M13KE 由M13mp19衍生的溶源性噬菌体。 随机7肽与次要衣壳蛋白N-端 融合,经细胞膜分泌,噬菌斑 模糊不透明,用有α-互补的宿 主菌在含Xgal/IPTG的平板上可 呈蓝斑 。 融合蛋白表达时N端有一段 信号肽前导序列,蛋白分 泌后前导序列被切除,使 随机七肽直接展示于成熟 蛋白的N端。 the leader in enzyme technology 噬菌体展示肽库 E. coli ER2738 宿主菌 - 28 gIII 测序引物 (用于人工测序) - 96 gIII 测序引物 (用于自动测序) 链霉亲和素 Streptavidin 生物素 试剂盒组成 the leader in enzyme technology 文库克隆载体可以买到吗? ? ? ? ? 用 来 构 建 所有这三种Ph.D.文库的载体, M13KE (# E8101S), 是 可 以 购 买 到 的。 M13KE 是M13mp19 的 衍 生 株 , 其pIII 基 因的5 ’端构建了限制性酶切位点,用户 可 以 将 设 计 好 的 人 工 基 因 盒 ( synthetic cassette) 插 入 此 处 构 建自己的肽库。 因为M13KE是噬菌体,而不是噬菌粒载体,所以在已加工的病毒子 上所有5个拷贝的pIII蛋白均携带有展示肽序列。 另外,大于20-30个氨基酸的展示多肽会影响噬菌体的感染力,所 以此载体仅适合展示短的多肽。 the leader in enzyme technology M13K07 Helper Phage ? ? ? ? 由M13衍生而来。在M13复制起始点处,插入有卡那 霉素抗性基因。 能在无噬菌质粒的情况下复制。 当有噬菌质粒时,由于噬菌质粒含有野生型M13或 者f1复制起始点,因此,单链噬菌质粒的DNA会被 优先包装并分泌。 不能用M13KO7作为克隆载体,如果要克隆噬菌体展 示库,建议使用M13KE噬菌体克隆载体。 the leader in enzyme technology M13噬菌体与其他噬菌体比 较有什么优点? ? ? ? M13噬菌体为非裂解性噬菌体(溶源性),周质内组装,经细胞 膜分泌,噬菌斑的形成不是由于菌体裂解而是由于细胞生长力减 弱所致,因此噬菌斑是浑浊的而不是清亮的,用有α -互补的宿主 菌在含 Xgal/IPTG的平板上可呈 蓝斑 。 由于 M13噬菌体在增殖期间不裂解宿主菌。简化了噬菌体纯化步 骤,只用简单的 PEG沉淀方法就足以将噬菌体与其他所有污染的 细胞蛋白分开。 而其他用于噬菌体展示的噬菌体如: T7, T4和 Lambda噬菌体均 为裂解性噬菌体,每轮淘选之间都需要花时间进行纯化,以避免 淘选扩增的噬菌体污染有细胞蛋白(如:有些蛋白酶类物质会在 淘选时将靶分子降解掉)。 the leader in enzyme technology NEB的噬菌体文库能展示cDNA 文库吗? ? ? 不适合于 cDNA文库展示,因为这种表达需要使目的蛋白序列在 前导序列(蛋白分泌所需要的)和噬菌体包膜蛋白 pIII或 pVIII的 N 端序列之间保持读码框架一致,这样产生的 M13 cDNA文库中, 能有效表达的克隆会非常少。 Novagen的 T7 Select 噬菌体展示系统可以将 cDNA插入片段融 合在包膜蛋白的 C末端,但是该系统利用的是裂解性噬菌体 T7而 不是溶源性噬菌体 M13,淘选扩增的噬菌体可能会污染有细胞蛋 白,故需要化更多的时间进行噬菌体的纯化。 货号 产品名称 规格 价格 E8100S Ph.D.-7 噬菌体表面展示试剂盒 10次淘选 E8110S Ph.D.-12 噬菌体表面展示试剂盒 10次淘选 E8120S Ph.D.-C7C 噬菌体表面展示试剂盒 10次淘选 E8101S Ph.D.多肽展示克隆系统 20 μ g the leader in enzyme technology NEB提供的三种随机肽库 the leader in enzyme technology Recombinant Phage Antibody system 用于克隆、表达和检测小鼠抗 体基因 噬菌质粒-Helper phage系统 抗体片段克隆于噬菌质粒与 pIII蛋白融合展示在M13噬菌 体表面 Helper ph
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