基因工程步骤精编.ppt

胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 2、将目的基因导入动物细胞 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 ①方法：显微注射法 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、 遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 3.将目的基因导入微生物细胞 四、目的基因的检测与鉴定 分子水平检测: 是否插入目的基因 是否转录 是否翻译 个体生物学水平鉴定 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 ① 首先取出转基因生物的基因组DNA； （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: ② 将含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针； ③ 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中。 （一）检测 如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。 （二）鉴定（个体生物学水平） 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原-抗体杂交（蛋白质是抗原） ②过程:用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA。 * 转化指细菌吸收外源性DNA而改变自身遗传性状的现象。在分子克隆技术中，转化特指将质粒DNA或以它为载体构建的重组子直接导入细菌细胞的过程。 在分子克隆技术中，转导特指以噬菌体DNA为载体，将外源DNA导入细菌细胞的过程。在《分子克隆实验指南》中，转染特指“将外源基因导入哺乳动物细胞的一系列技术的通称”。 一、学习目标 简述基因工程原理及基本操作过程 二、学习重点和难点 1、基因工程基本操作程序的四个步骤（重点） 2、从基因文库中获取目的基因（难点） 3、利用PCR技术扩增目的基因（难点） 1.2基因工程的基本操作程序 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 编码区下游 调控遗传信息的表达 (调控序列) 外显子 (能编码蛋白质) 内含子 (不能编码蛋白质) 启动子 终止子 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 1 2 3 4 5 转 录 mRNA前体 成熟mRNA 加 工 切除内含子转录部分 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 用3分钟阅读P8-11，并思考下列问题，然后用2分钟与同桌交流、讨论。 1、获取目的基因的常用方法有哪些? 2、何谓基因文库？其类型有哪几种？ 3、如何构建基因文库？ 4、何谓PCR技术？其原理、条件和过程是怎样的？ 一、目的基因的获取 1、目的基因：主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 2、获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因； （2）利用PCR技术扩增目的基因； （3）通过DNA合成仪用化学方法直接合成 3、基因文库 　　 又称DNA文库，将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，所有受体菌的集合即为该生物的基因文库。 基因文库由外源DNA片段、载体和宿主组成。 按外源DNA片段的来源分基因文库分为： 基因组DNA文库：包含了某物种的所有的基因 部分基因文库：只包含了部分基因文库（如cDNA文库） 1）载体DNA片段的制备 DNA分离纯化→限制酶切 2）供体DNA片段的制备 总DNA分离纯化→酶切法→分离特定大小DNA片段 3）载体与基因组DNA片段的连接 4）重组DNA转化受体细胞 4.基因文库的构建 ①基因组文库的构建 通过对受体菌的培养而储存基因 ② cDNA文库的构建 （反转录法） 目的基因的mRNA 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA(目的基因) 接到载体 ③基因组文库和部分基因文库的比较 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 思考：怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 根据基因的有关信息如根据基因的转录产物mRNA、基因的核苷酸序列、基因翻译产物蛋白质等来获取目的基因。 2、利用PCR技术扩增目的基因 —聚合酶链式反应 PCR ① 概念：PCR全