BeyoRTIIIcDNA第一链合成试剂盒.PDF

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：order@ 技术咨询：info@ 碧云天网站 微信公众号 网址： BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒 产品编号 产品名称 包装 D7178S BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒 20次 D7178M BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒 100次 D7178L BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒 500次 产品简介：  碧云天生产的BeyoRT™ III cDNA 第一链合成试剂盒，即BeyoRT™ III First Strand cDNA Synthesis Kit，是一种采用了经过 改造和优化的快速高效(短至10min 完成反转录) 、热稳定(高达55ºC) 、高精确度、产物超长(长达12kb)的BeyoRT™ III M-MLV 反转录酶，可以用于以总RNA 、mRNA 等为模板反转录合成cDNA 第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA 第一链合 成所需的各种试剂。  使用本试剂盒合成的第一链，可以直接用于后续的常规PCR 、real-time PCR 也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR) 、cDNA 的第二链合成以及cDNA 文库的构建, 尤其是逆转录所得目的基因的克隆等。  使用本试剂盒可以轻松完成长度为8 kb 以下基因的反转录(参考图1)，反转录的最大长度可以达到 12 kb 。 图1. 使用本试剂盒对总RNA反转录后，对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-12kb的cDNA 可以非常高效地被反转录。  本试剂盒中的BeyoRT™ III M-MLV 反转录酶热稳定性好，反转录的效率高。本产品最适反应温度为42ºC ，当温度达到50ºC 时仍具有很高活性，对于长度较短的cDNA 反转录，温度达到55ºC 时也可获得较高产量的cDNA 。高温反转录对于高GC 含量RNA 的反转录，能有效减少二级结构，提高反转录效率。反转录的速度快，反转录的速度快，6kb 以下的cDNA 反转 录只需0.5h 即可完成，3kb 以下的cDNA 反转录10min 即可完成(参考图2) 。 图2. BeyoRT™ III M-MLV反转录酶在不同温度反应不同时间的反转录效果。从HEK293T细胞抽提获得的总RNA 2µg，在20μl 反转录体系中按照图中所示温度、时间进行反转录。反转录后取1μl反转录产物进行目的基因(2.6kb 的YWHAZ基因和6.0kb 的ADAR 1基因) 的PCR扩增和电泳。  本试剂盒提供了RNase Inhibitor ，确保在反转录过程中的RNA 不会被RNA 酶所降解并取得良好的反转录效果。  本试剂盒还提供了Oligo(dT)18 和random hexamer 这两种引物，前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA 的反转录，后者适合 用于任何RNA 的反转录。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA 第一链的合成。  失活或抑制：80ºC孵育10min可以导致本产品中的BeyoRT™ ШM-MLV反转录酶失活；EDTA 、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐 或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRT™ ШM-MLV反转录酶有抑