《第章细胞生物学研究方法》课件.pptVIP

* 一、细胞培养 指在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，使之生存和生长的技术。 1.体外细胞培养的条件 (1)营养：培养基提供。 (2)生存环境：无菌、合适的温度、一定的渗透压、和气体。 (3)废物的排除：定期更换培养基。 * 2.动物细胞培养 (1)原代培养 （primary culture）：即培养直接来自动物机体的细胞群。通常指１～１０代以内的培养。 (2)传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养。 (3)贴壁培养：培养细胞贴壁生长，呈多态性，单层生长，保持接触抑制（contact inhibition），也叫单层细胞培养。 (4)悬浮培养：细胞在培养过程中一直悬浮在培养液中，不贴壁。 * (5)细胞系（cell line）：能够传代40-50次并且仍保持原来染色体的二倍体数量及接触抑制行为的传代细胞。 (6)细胞克隆：用单细胞克隆培养或药物筛选的方法从某一细胞系中分离出单个细胞，并由此增殖形成的具有相同遗传形状的细胞群体。 (7)细胞株（cell strain）：经过生物学鉴定具有特殊遗传标记或性质的细胞克隆。 * 实验室中常用的几种连续细胞系 细胞系名称 细胞类型 来源 3T3 成纤维细胞 小鼠 HeLa 宫颈癌上皮细胞 Henrietta Lacks BHK21 成纤维细胞 叙利亚仓鼠 PtKl 上皮细胞 袋鼠 L6 成肌细胞 大鼠 PCI2 嗜铬细胞 大鼠 SP2 浆细胞 小鼠 SP2／0 骨髓瘤浆细胞 小鼠 CHO 卵巢细胞 中国地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 * Hela细胞　　　　　　　　　CHO细胞 * 3.植物细胞培养 (1)外植体培养：利用叶片、茎、根等诱导产生愈伤组织，进而培养成植株。 (2)悬浮细胞培养：大规模细胞培养，制取代谢产物。 (3)原生质体培养：培养脱壁后的细胞，特点： 比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； 便于进行细胞融合，形成杂交细胞； 适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。 (4)单倍体培养：通过花药或花粉培养获得单倍体植株。 * * Plant Cell Culture Animal Cell Culture * 二、细胞融合与单克隆抗体技术 1.细胞融合（cell fusion） (1)概念：指自发或人工诱导下，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合或细胞杂交。 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 (2)诱导方法：生物方法（仙台病毒）、化学方法（PEG）、物理方法（电击和激光）。 * 2.单克隆抗体技术 1975年英国人Kohler和Milstein发明，因此获1984年诺贝尔奖。 (1)原理：Ｂ淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能无限分裂，而瘤细胞虽然可以在体外长期培养，但不分泌抗体。将这两种细胞融合得到的杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，既能产生抗体又能无限增殖。 (2)操作过程： * * 三、显微操作(micromanipulation）技术 在倒置显微镜下利用显微操作仪进行细胞或早期胚胎操作的一种方法,包括细胞核移植、显微注射、胚胎移植以及显微切割等。 * 基因剔除(gene knockout)指一个有功能的基因通过基因工程方法完全被剔除的人工突变技术. 已经用于几种遗传病的研究，还可用于研究特定基因的细胞生物学活性以及研究发育调控的基因作用等。 四、遗传分析 * 马里奥·卡佩奇 奥利弗·史密斯 马丁·埃文斯 美英三科学家获2007年度诺贝尔生理学或医学奖 * 第四节 用于细胞生物学研究的模式生物 * 表2-2:不同光线的波长 * 1.基本构造: (1)电子枪：包括灯丝阴极和阳极。阴极电压50~120KV，阳极0V，两极电压差为加速电压。电子束波长与加速电压的平方根成反比。 (2)电磁透镜：改变电子方向。 (3)真空系统：保持电镜真空。 (4)照相系统： （一）电子显微镜的基本知识 * 显微镜 分辨本领 光源 透镜 真空 成像原理 光镜 200nm 可见光 （400-700nm） 玻璃 透镜 不要求真空 利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化 电镜 0.1nm 电子束 （0.01-0.9nm） 电磁 透镜 1.33x10-5～1.33x10-3Pa 利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差 2.电镜与光镜的比较 显微镜成像的基本要素有哪些? * 电镜与光镜光路图比较 * 透射电子显微镜 (1)透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM) 3.电镜的类型 * * (2)