细胞生物学自设计性实验.pptxVIP

细胞生物学自主设计性实验;主题：观察衰老细胞中线粒体数变化;原理; 2、活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致引起细胞死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用，一般应选择那些无毒或毒性小的碱性染料（易溶于类脂质）并配成较稀的溶液来使用。; 3、从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。 细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。;实验材料;实验方法; 5、取部分原代细胞染色制片观察线粒体数，拍照。 6、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。加入1~2ml 0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。 7、马上吸走胰酶液 ，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟。 8、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，根据比例来取需要的量，加入4ml左右的培养液。 9、前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱。 10、查阅资料了解小鼠肝细胞体外培养分裂周期，在每次分裂后取部分细胞染色制片观察，拍照。 11、直至细胞不在分裂，观察所有照片对比线粒体数目。 12、分析讨论得出结论。;结论