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幽门螺杆菌耐药情况剖析 　　[摘要] 目的 调查贵阳医学院附属医院上消化道疾病患者中分离出的幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）对常用抗生素的耐药情况，为临床选用抗生素治疗Hp提供实验室依据。 方法 收集2012年1月～2013年1月贵阳医学院附属医院胃镜室患者胃黏膜标本580例，微需氧环境培养5～7 d，对临床Hp菌株采用E-test法检测对5种常用抗生素（甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星、四环素）的耐药情况。 结果 580例胃黏膜标本其阳性检出率为57.6%（334/580），污染例数为21株；经分离培养得到的313株Hp对甲硝唑、左氧氟沙星、四环素、阿莫西林及克拉霉素的耐药率分别为87.2%、46.9%、23.4%、25.5%和8.5%。 结论 贵阳医学院附属医院幽门螺杆菌对甲硝唑的耐药性较高，对克拉霉素的敏感性较好。 　　[关键词] 幽门螺杆菌；抗生素；药敏实验；耐药性 　　[中图分类号] R378 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（b）-0088-03 　　幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）是一种单极、多鞭毛、末端钝圆的革兰阴性螺杆菌，为胃部常见致病菌，其致病性与毒力性均很强。目前研究认为，Hp感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因，与胃癌、MALT淋巴瘤的发生密切相关。据文献报道，全世界超过50%的人有Hp感染，Hp感染在我国分布广泛，感染率为40%～90%，多数地区为50%左右，平均感染率为59%[1]。Hp的根除有助于溃疡愈合，可降低胃癌发生的危险性，延缓MALT淋巴瘤的进程，因此，Hp感染的治疗一直是胃肠病领域的研究焦点之一。Hp根除治疗一般采用联合用药，即质子泵抑制剂PPI或铋剂，联合应用2种抗生素。但随着抗生素的广泛应用和Hp根除治疗的普遍开展，Hp对常用抗生素的耐药率呈现逐年上升趋势。目前治疗Hp常用的抗生素包括硝基咪唑类、大环内酯类、青霉素类、四环素类以及喹诺酮、硝基呋喃、利福霉素类，并且各地所报道的各药物耐药率存在较大差异。为了初步了解Hp的感染情况及对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星、四环素的耐药情况，本实验对收集的580例胃黏膜标本进行Hp培养，并对Hp临床分离株进行上述5种抗生素敏感性实验。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 菌株来源 Hp临床菌株均分离自2012年1月～2013年1月贵阳医学院附属医院消化科就诊并经病理诊断为胃溃疡、胃炎患者共580例，利用胃镜活检钳采集患者胃窦部黏膜，进行Hp培养，菌株经尿素酶实验、过氧化氢酶实验和Hp快速诊断实验进行鉴定。Hp菌株ATCC700392、ATCC700824购买于ATCC。由贵阳医学检验学院实验教学中心保存。 　　1.1.2 主要试剂 幽门螺杆菌快速尿素酶试纸（杭州天和微生物试剂有限公司）；甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素、阿莫西林、四环素E-test试纸条（瑞典ABBiodisk公司），万古霉素（批号为：V2002，纯度98%，规格100 mg，美国Sigma）；两性霉素（批号为：A9528，纯度98%，规格100 mg，美国Sigma）；多粘霉素（批号为：S0414，纯度98%，规格25 mg，美国Sigma）；TMP（批号为：T7883，纯度98%，规格1 g，美国Sigma），哥伦比亚琼脂（英国OXOID公司）；脱纤维羊血（广州蕊特生物科技有限公司）； 　　1.3 方法 　　1.3.1 细菌分离培养和鉴定 取行电子胃镜检查患者的胃窦部胃黏膜组织标本，放入装有预冷脑心浸液无菌离心管中，经研磨后利用Hp快速尿素酶实验进行筛选，阳性者接种于哥伦比亚琼脂血平板37℃微需氧袋培养72～96 h后，经革兰染色镜检和过氧化氢酶实验、氧化酶试验、尿素酶试验鉴定为Hp后，进行增菌及传代培养[2-3]。 　　1.3.2 药敏试验 将临床株Hp用无菌营养肉汤配制成109 cfu/mL浓度的悬液，均匀涂布于含有10%脱脂羊血哥伦比亚血琼脂平板，待干后贴上E-test试纸条（甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素；左氧氟沙星、四环素），孵育2 d后观察Hp对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素、左氧氟沙星和四环素的抑菌情况，抑菌环和试条交界处的刻度即为最低抑菌浓度值（MIC）。甲硝唑32 μg/mL；阿莫西林8 μg/mL；克拉霉素2 μg/mL；左氧氟沙星2 μg/mL；四环素2 μg/mL判定为耐药[4-5]。 　　2 结果 　　2.1 Hp的培养结果 　　580例患者中Hp感染阳性为334例，检出率为57.6%，其中经分离培养得到的313株为无色透明，针尖样细小，表面光滑湿润的Hp典型的菌落形态，经革兰染色镜检呈阴性，菌体细长弯曲