人IL37b基因真核表达载体的构建与表达-中国试验动物信息网.PDF

２０１６年６月 中国实验动物学报 Ｊｕｎｅ２０１６ 第２４卷　 第３期 ＡＣＴＡ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭ ＡＮＩＭＡＬＩＳ ＳＣＩＥＮＴＩＡ ＳＩＮＩＣＡ Ｖｏｌ． ２４　 Ｎｏ． ３ 研究报告 人 ＩＬ⁃３７ｂ基因真核表达载体的构建与表达 １ ２ ∗ ３ ４ ４ ∗ 姚静 ，程江 ，裴雪枫 ，王静宇 ，袁明 （１．石河子大学医学院，新疆 石河子　 ８３２０００；２．石河子大学第一附属医院检验科，新疆 石河子　 ８３２０００； ３．辽宁医学院，辽宁锦州　 １２１００１；４．中国航天员科研训练中心， 航天医学基础与应用国家重点实验室，北京　 １０００９４） 　 　 【摘要】　 目的　 构建ｐＥＧＦＰ⁃Ｎ１／ ＩＬ⁃３７ｂ真核表达载体，并检测其在ＴＨＰ⁃１细胞中的表达情况。 方法　 从人 ＰＢＭＣｓ 中提取总ＲＮＡ，利用ＲＴ⁃ｑＰＣＲ技术扩增出ＩＬ⁃３７ｂ基因编码区序列，克隆至ｐＥＧＦＰ⁃Ｎ１真核表达载体，将构 建的重组质粒ｐＥＧＦＰ⁃Ｎ１／ ＩＬ⁃３７ｂ转染到ＴＨＰ⁃１细胞中，通过ＲＴ⁃ｑＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＩＬ⁃３７ 的表达。 结果　 双 酶切及基因测序结果显示ＩＬ⁃３７ｂ基因正确插入真核表达载体ｐＥＧＦＰ⁃Ｎ１ 中；ＲＴ⁃ｑＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示转 染ＴＨＰ⁃１细胞后，ＩＬ⁃３７表达水平明显升高（Ｐ＜００１）。 结论　 成功构建了新型抗炎因子ＩＬ⁃３７真核表达载体ｐＥＧ⁃ ＦＰ⁃Ｎ１／ ＩＬ⁃３７ｂ，为进一步研究ＩＬ⁃３７功能及与相关疾病的关系奠定基础。 【关键词】　 白细胞介素⁃３７；基因克隆；真核表达载体；ＴＨＰ⁃１细胞 【中图分类号】 Ｑ９５⁃３３　 　 【文献标识码】 Ａ　 　 【文章编号】 １００５⁃４８４７（２０１６）０３⁃０２６８⁃０５ Ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－４８４７２０１６０３０１０ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩＬ⁃３７ｂ ｇｅｎｅ １ ２∗ ３ ４ ４ ∗ ＹＡＯＪｉｎｇ ，ＣＨＥＮＧＪｉａｎｇ ，ＰＥＩ Ｘｕｅ⁃ｆｅｎｇ ，ＷＡＮＧＪｉｎｇ⁃ｙｕ ，ＹＵＡＮ Ｍｉｎｇ （１． Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｈｉｈｅｚｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ８３２０００，Ｃｈｉｎａ；２． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｓｈｉｈｅｚｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ８３２０００；３． Ｌｉａｏｎｉｎ