《菌种复壮保藏》课件.pptVIP

第三节 工业微生物菌种的衰退、复壮与保藏 一、菌种变异及退化机理 1、菌种退化 生产菌种或选育过程中筛选出来的较优良菌株，由于进行接种传代或保藏之后，群体中某些生理特征和形态特征逐渐减退或完全丧失的现象。 表现—— 形态上：分生孢子减少或菌落颜色改变， 生理上：生长速度变慢，目的代谢物合成能力降低，产量下降，糖化力降低，抗噬菌体能力下降，突变株回复突变等 2、引起菌种退化的原因 基因突变 变异菌株性状分离 连续传代 其他因素 菌种的自发突变和回复突变是引起菌种自身退化的主要原因。 变异菌株因遗传组成的自身修复，使原有的遗传障碍解除，代谢途径发生变化，从而恢复原有的特性，表现出原育种过程中已获得的优良性状的退化。 当诱变的单菌落中只有一个孢子或细胞是高产时，在移接传代过程中，高产菌株数量减少，产量就下降 多核细胞由于核分离而使性状多样性，产量也随之变化 连续传代是菌种发生退化的直接原因 其他因素 培养基灭菌升、降温的不同， 培养基存放时间的不同， 采用老龄菌和多核菌丝、 菌种保藏方法不同 保藏操作不当等 都比较容易引起菌种退化。 二、防止菌种退化和退化菌种的复壮 1、防止菌种退化的方法： 控制传代次数 选择合适的培养条件 利用不同类型的细胞进行传代 选择合适的保藏方法 2、退化菌种的复壮 配合一定的培养条件，对退化菌株进行单菌落或单细胞分离，淘汰退化的个体，保留纯化菌种。 将芽胞杆菌的悬液加热至90℃处理数分钟，杀灭以退化的菌体，保留芽胞；再将芽胞或孢子进行传代，以淘汰退化的个体。 提供特殊的培养条件，使环境有利于优良性状的菌株的生长而不利于退化菌株的生长，从而淘汰已退化的菌株个体。 将分离后得到的初筛菌株先保藏，再进行复筛考察，从中选出稳定性较好的菌种。 同时应用上述方法的两种或两种以上的方法，会收到更好的复壮效果。 三、菌种保藏 1、目的 按人们的不同要求，把从自然界分离到的野生型，或经过人工选育得到的变异型微生物纯种，使其存活，不丢失、不混乱、不污染、不发生或少发生变异，保持其优良性状或生理特性，使其处于休眠状态（一般使用多种方法保存）。 三、菌种保藏 2、原理 使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态，也就是使微生物的新陈代谢作用限制在最低的范围内。 3、技术 有针对性的创造干燥、低温、缺氧的外界条件，是微生物菌种保藏的基本技术。 保藏时，一般利用菌种的休眠体（孢子、芽胞等），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等，使菌体的代谢活性处于最低状态，同时也应考虑到经济、简便方法。 由于微生物种类繁多，代谢特点各异，对各种外界环境因素的适应能力不一致，一个菌种选用何种方法保藏较好，要根据具体情况而定。 为了有效的保藏微生物菌种，首先需要有良好的培养基。 常用的细菌培养基 常用的放线菌保藏培养基 常用的酵母菌保藏培养基 常用的霉菌保藏培养基 牛肉膏琼脂、酵母膏葡萄糖琼脂、甘露醇琼脂 高氏合成一号 麦芽汁琼脂 Czapek agar、马铃薯琼脂 《菌种保藏手册》介绍了406种培养基的成分、配方和用途。 4、方法 7种常用菌种保藏方法的比较 方法 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法 （斜面） 低温（4℃） 各大类 约1～6月 简便 冰箱保藏法 （半固体） 低温（4℃），避氧 细菌，酵母菌 约6～12月 简便 石蜡油封藏法* 低温（4℃），阻氧 各大类** 约1～2年 简便 甘油悬液保藏法 低温（－70℃），保护剂（15～50％甘油） 细菌，酵母菌 约10年 较简便 砂土保藏法 干燥，无营养 产孢子的微生物 约1～10年 简便有效 冷冻干燥保藏法 干燥、低温、无氧，有保护剂 各大类 5~15年 繁而高效 液氮保藏法 超低温（－196℃），有保护剂 各大类 15年 繁而高效 *用斜面或半固体穿刺培养物均可，一般置于4℃下。 **对石油发酵微生物不适宜。 菌种保藏的注意事项 菌种在保藏前所处的状态 菌种保藏所用的基质 操作过程对细胞结构的损害 谢谢使用！ * *