浅述转基因食品检测技术.docVIP

浅述转基因食品检测技术 　　[摘要]迄今为止，转基因牛、羊、鱼、虾、粮食和水果在国内外均已成功并已投入食品市场。因此，转基因食品的检测技术成了重中之重。概述转基因食品的情况，分析其检测技术特点。 　　[关键词]转基因食品 检测技术 　　中图分类号：TS2文献标识码：A 文章编号：1671－7597（2008）0420073－01 　　 　　转基因食品主要是指利用基因工程技术改变基因组构成，将某些外源基因转移到动物、植物或微生物中去，改造其遗传物质，使其性状、营养价值或品质向人们所需目标转变，并由这些转基因生物所生产的食品。转基因食品也称基因改造食品或基因修饰食品（Genetically Modified Food，GMF）。近几年，随着转基因食品的快速发展，转基因食品的安全性受到广泛关注，因而对转基因食品的检测是非常必要的。 　　 　　一、转基因食品概述 　　 　　DNA是生物体内的遗传物质，通过DNA的复制、转录和翻译将遗传信息进行传递和表达。通过对生物体内DNA分子的修饰改造从而改变生物体的遗传性状，这是转基因技术的理论基础。DNA限制性内切酶及基因克隆等技术的发现为转基因操作奠定了技术基础。转基因技术的主要步骤：分离目的DNA片断，将目的片断克隆到细菌的DNA中，构建重组DNA，将重组DNA扩增后，利用农杆菌介导、基因枪、化学物质诱导、电穿孔、微注射及花粉管通道等方法将连接了启动子和终止子的目的基因导入到目标植物的细胞中，最后筛选含目的基因的转化细胞，并诱导产生转基因植株，经扩繁后，加工生产出转基因食品。 　　随着转基因食品的发展，转基因食品亦是一把双刃剑，带给我们利益的同时也给我们带来了隐患。随着世界各国对于转基因食品安全性认识不断深入，各国在积极发展转基因技术的同时也加强了对转基因产品的监控和管理。世界上最早制订转基因生物安全管理法规的是美国，早在1976年美国就颁布了《重组DNA分子研究准则》，但直至2001年才强制要求转基因食品在上市前必须确认其与传统产品相比有同等安全性；日本针对转基因成分超过5％的食物，执行强制性标签制度，部分转基因成分被禁止，如“星联”玉米等；欧盟议会于1997年5月15日通过了《新食品规程》的决议，规定欧盟成员国对上市的转基因食品必须要有“GMO”标签。为保障我国市场上转基因食品的生物安全，我国已相继出台了相应管理办法。 　　 　　二、转基因食品检测技术 　　 　　（一）PCR定性筛选检测方法 　　在1996年，德国伯恩斯坦大学的Meyer Rolf等论证了PCR检测转基因食品的可能性，植物细胞转入的基因成分一般包括启动子(promotor)、报告基因(reporter gene)、目的基因(targetgene)和终止子(terminator)，其中启动子和终止子为表达目的基因所必需。目前，转基因植物所采用的启动子主要为来源[基金项目]广东省科技计划项目（2002B3100103）于花椰菜花叶病毒的Camv35s启动子、根瘤农杆菌的nos启动子及玄参花叶病毒的FMV35s启动子；广泛应用的终止子分别来源于根瘤农杆菌的nos终止子、花椰菜花叶病毒的camv终止子以及新霉素磷酸转移酶NptlI终止子。针对这些基因的PCR扩增可涵盖95％的现有的转基因植物的需要。 　　PCR定性检测是高灵敏度的DNA水平检测，但常伴有各种假性结果出现： 　　（1）DNA提取时产生的各种反应抑制因子，使PCR呈假阴性；（2）产品深加工时核酸被破坏成碎片，含量极低，使PCR呈假阴性；（3）当作物受到花椰菜花叶病毒的感染而带有35S启动子或因农杆菌感染而带有nos终止子时，PCR呈假阳性；（4）实验室的残留污染使检测结果呈假阳性；（5）在收获、运输或加工过程中转基因食品与非转基因食品产生交叉污染也会使检测结果不准确。要防止检测出现假阴性结果，必须在检测过程中严格遵守操作规程，优化PCR条件，在DNA提取过程中尽量去除可能抑制PCR反应的物质，并可通过扩增真核生物的18SrRNA基因来消除假阴性；要消除转基因食品检测中假阳性结果的影响，可采用southem杂交、PCR产物纯化测序或PCR扩增产物酶切分析等方法，对样品同时检测其Camv35s和nos基因双元件，可避免某些作物因自然感染花椰菜花叶病毒或根癌农杆菌产生的假阳性结果。 　　（二）实时荧光定量PCR法 　　实时荧光PCR技术最早在1996年由美国Applied Biosystems公司推出，是指在常规PCR基础上添加了一条标记了两个荧光基团的探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量的方法。 　　目前我们应用于实时定量PCR检测体系中的荧光探针主要有3种：分子信标探针，TaqMan