高致病性猪蓝耳病抗体免疫效果检测剖析.docVIP

高致病性猪蓝耳病抗体免疫效果检测剖析 　　摘 要：为切实了解某地区生猪养殖场的猪蓝耳病免疫效果，本试验分别从规模场及散养地随机抽取了700份生猪血清，用酶联免疫吸附试验检测PRRS免疫抗体。结果显示：规模场蓝耳病免疫抗体平均合格率达87%，而散养地蓝耳病免疫抗体平均合格率仅为78%，说明部分散养户家的猪蓝耳病免疫效果不够理想，需要进一步采取切实有效的措施，提高猪只的有效免疫率，保证生猪的养殖质量。 　　关键词：高致病性；猪蓝耳病；免疫抗体；检测；效果 　　高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合症（俗称蓝耳病）病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。仔猪发病率可达十成、死亡率可达五成以上，母猪流产率可达三成以上，育肥猪也可发病死亡。该病的发生给养猪生产场户带来巨大的经济损失，也给食品安全造成危害，因此，做好高致病性猪蓝耳病的防控工作是保证畜牧业稳定健康发展的关键。随着该病不断流行和传播，免疫预防是目前解决该问题的最有效途径。现结合试验实践与研究，采用ELISA检测试剂检测猪免疫后抗体，以保证猪只体内抗体的免疫效果。 　　一、材料与方法 　　1.1试验材料 　　1.1.1血清样品 　　来自2个种场、8个规模猪场、50个散养户随机抽取的700份猪血清。 　　1.1.2试验疫苗 　　猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC-JXA1。 　　1.1.3诊断试剂 　　LSI猪繁殖和呼吸综合征抗体检测试剂盒。 　　1.1.4实验设备 　　单道和多道微量移液器、37℃恒温箱、酶标仪、纯水仪、量杯、量筒、冰箱等。 　　1.2检测原理及标准 　　1.2.1检测原理 　　LSI猪繁殖和呼吸综合征抗体检测试剂盒是利用间接ELISA方法建立的。特异的PRRSV包被在96孔ELISA板上，在反应板上加入按比例稀释好的待检测猪血清样品，样品中的特异性抗体与反应孔中包被的特异性抗原反应，形成“包被抗原+PRRSV-IgG”，在洗版的过程中不会被洗掉。当添加酶标复合物时，这些酶标复合物就会与“包被抗原+PRRSV-IgG”发生反应，形成“包被抗原+PRRSV-IgG+酶标抗猪IgG二抗”复合物，没有结合的酶标复合物在洗板的过程中被清洗。最后再加入对氧化酶敏感的可以显色底物，显色的颜色深浅与所检血清样品所含的PRRSV的抗体浓度成正比。 　　1.2.2判定标准 　　为确保试验有效，必须保证阳性对照的平均值OD450大于0.6，并且阳性对照的平均值/阴性对照的平均值大于4.0。 　　IRPC=（OD450样品-OD450阴性对照的平均值）/（OD450阳性对照的平均值-OD450阴性对照的平均值）×100。 　　IRPC小于或者等于20.0判定阴性；IRPC大于20.0判定为阳性。 　　1.3试验方法 　　1.3.1待测样品采集 　　选定某地区的2个种猪场，随机选取来自不同镇乡的8个规模猪场和来自10个镇乡的50个散养户（每个乡镇抽取5户）。选取来自不同镇乡的猪场和养殖户是为了保证试验的结果的准确性。在猪蓝耳病免疫后28d随机抽取猪血液样品，每个猪场抽取20份血样，每个散养户抽取10份血样。 　　1.3.2实验操作流程 　　试验前将试剂恢复至常温，按照相应的比例配置洗液和样本稀释液，并将样本200倍稀释。在反应板上加上50μL阳性对照和阴性对照各两份及200倍稀释的待测血清，封膜，37℃反应1h，去膜，300μL洗板3次，拍干。在每个孔中加入50μL酶标抗体，封膜，37℃反应1h，去膜，300μL洗板3次，拍干。在每个孔中加入50μL的底物，轻轻摇板，置于20～25℃室温避光环境下反应10min。加入50μL的终止液，在450nm波长读取结果。 　　1.3.3补免再测规程 　　二、试验结果 　　猪蓝耳病免疫抗体检测结果见表1。为了便于表中内容清晰直观，各乡镇名称用数字1～10代替。 　　对于4、7、8、9、10五个乡镇出现的蓝耳病免疫抗体检测不合格的5个养殖户进行补免，补免28d后再次检测，结果如表2所示。 　　表1 猪蓝耳病免疫抗体检测结果 　　表2 猪蓝耳病补免后抗体检测结果 　　三、讨论 　　3.1结果分析 　　通过结果可以看出，该地区所有养猪场户都进行了猪蓝耳病的免疫，免疫效果总体良好，平均合格率达到了79.73%，但是免疫效果参差不齐。从养殖规模分析，种场免疫合格率高达95%，规模场免疫合格率达到87.5%，而散养户免疫合格率仅78.2%，种场明显高于规模场，规模场高于散养户。从养殖区域分析，1、2、3、5四个乡镇免疫效果高于其他乡镇，各乡镇平均免疫合格率均高于总体平均免疫合格率，且未出现免疫不合格场户，尤其1乡镇免疫效果更佳，免疫合格率高，达到91.43%，而且整体免疫均衡，免疫合格在8