磁性载体固定化α-淀粉酶的研究-应用化学专业论文.docx

Immobilized of α-Amylase Using Magnetic Carrier A Dissertation Submitted to The Graduate School of Henan University In Partial Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master of Science By Zhang Yang Supervisor: Prof. Dong Facai May , 2015 摘 要 淀粉酶（Amylase，E.C.3.2.1.1）作为一种生物催化剂，在自然界的分布非常广泛， 无论是高等植物还是微生物体内，都可以产生淀粉酶，因此，工业上对淀粉酶的生产 和应用也要比其他酶制剂多。然而，在工业生产过程中，往往需要使用大量的酶制剂 来催化反应的进行，但反应后的产物与游离酶常常难以进行有效的分离，造成酶制剂 的严重浪费。自上世纪 90 年代以来，酶的固定化技术得到了充分的研究，并取得了一 些进展，特别是对用磁性复合载体固定化酶技术的研究。与游离酶相比，固定化酶在 催化反应完成后，可以通过简单、易操作的方法与反应产物分离，并且可以达到重复 使用、降低成本的效果。 本实验以纳米 Fe3O4 颗粒为磁核，采用共价交联法，将壳聚糖粉末均匀的包裹在 纳米 Fe3O4 颗粒表面，制备磁性复合载体颗粒。整个反应在壳聚糖与纳米 Fe3O4 的质 量比为 1:2、搅拌速度为 700 r/min，戊二醛的加入量为 1.0 mL 时，制备的 Fe3O4/CS 磁性复合载体的效果最好。采用电子扫描显微镜（SEM）、傅里叶变换红外光谱仪 （FT-IR）对磁性复合载体进行表征分析，结果显示，磁性复合载体颗粒呈黑色球状、 大小均一、分散性良好。用上述制备的磁性复合载体，对 α-淀粉酶进行固定，并优化 了固定化反应的条件。研究发现，磁性复合载体在经过 1.5% 的戊二醛溶液活化 60 min 后，在 pH 为 6.0、固定化温度为 20℃、固定化时间为 8 h 的条件下，固定化 α-淀粉酶 的酶活最高，为 14，654 U/g；固定化效率最大为 81%。 本实验还对固定化 α-淀粉酶的理化性质进行了研究，结果表明，固定化 α-淀粉酶 的最适 pH 为 6.0，与游离酶基本一致；最适反应温度为 60℃，与游离酶相比，其反应 温度提高了 20℃；固定化 α-淀粉酶重复催化反应 10 次后，其剩余活力仍为 50%；固 定化 α-淀粉酶在 4℃冰箱中，保存 40 d，其剩余活力仍为 73%，而游离酶在保存 20 d 后，几乎没有活性；综上所述，固定化 α-淀粉酶在最适反应温度、重复使用性、贮存 稳定性等方面都要大大优于游离酶，这将为后期工业的大规模生产和应用提供一定的 技术方法和参考依据。 I PAGE PAGE IV III III 关键词：纳米四氧化三铁，磁性复合载体，固定化酶，α-淀粉酶 ABSTRACT Amylase (Amylase, E.C.3.2.1.1) is widely distributed in nature as a biological catalyst, whether higher plants or microorganisms can produce amylase. Therefore, the industrial production and application of the amylase more than other enzyme preparations. However, in the process of industrial production, often need to use a large number of enzyme catalytic reaction, but the product and free enzyme is often difficult to effective separation, resulting in a serious waste of enzyme preparation. Since the 90s of last century, immobilized enzyme technology has been full researched, and has made some progress, especially using magnetic composite carrier to fix enzyme. Compared with the free enzyme, the immobilized enzyme can be s