最新第十四章__免疫学检测技术.pptVIP

第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 ELISA 基本原理 碱 性 磷 酸 酶 或 过 氧 化 物 酶 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 酶联免疫吸附剂测定 enzyme linked immunosorbent assay，ELISA 二、ELISA的种类 P320 直接法测定抗原 间接法测定抗体 双抗体夹心法测定抗原 双抗原夹心法测定抗原 竞争法测定抗原 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 二、ELISA的种类 双抗原夹心法测定抗原 第三节 免疫酶技术在食品检测中的应用 二、ELISA的种类 双抗体夹心法测定抗原 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体， ②酶标记的抗原或抗体， ③酶作用的底物。 根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 （一）双抗体夹心法 　 对抗原或抗体进行定性或定量的检测的原理 Ab excess Ag excess Equivalence – Lattice formation 对抗原或抗体进行定性或定量检测的原理 根据抗原抗体形成的免疫复合物的浓度进行定量检测。 P 312 第一节 免疫学检测技术原理 可作为抗原进行检查的物质： 微生物及其大分子产物 人和动物细胞 人和动物体内的各种大分子 各种半抗原 抗原或抗体检测原理 较早的抗原抗体反应检测方法 1、凝集反应 （Agglutination) 2、沉淀反应 (Precipitation) 3、补体结合试验 (Complement fixation test ) 4、中和试验 (Neutralization test) 一、凝聚反应(Agglutination) 二、沉淀反应 1、溶液中的沉淀反应 2、凝胶扩散沉淀 3、免疫电泳 血清免疫电泳 火箭电泳 对流免疫电泳 三、补体参与的反应 四、免疫标记的抗原抗体技术 酶联免疫吸附（ELISA） 一、凝集反应 凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。 一、凝集反应 凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一定条件下出现凝集。 二、沉淀反应 当抗原是可溶性分子时，与抗体结合则形成沉淀。 1、絮状沉淀反应 一系列试管中加入等量的抗体和递增量的抗原，在中性条件下37度保温1-2h，便可见到絮状的蛋白质沉淀。可用于寻找抗原抗体反应的合适比例，检测抗原抗体的分子比。 2、环状沉淀反应 在试管中加入抗体后，小心加入相应抗原，使抗原抗体步混合，37度保温10-20min，在二者界面上出现环状沉淀。不能用于定量测定。 3、双向扩散：又称琼脂扩散，是利用琼脂凝胶作介质的一种沉淀反应。 琼脂是多孔的网状结构，可使大分子物质通过，分子的扩散作用使分别两处的抗原抗体相遇，比例合适时形成沉淀。可观测到沉淀弧。 沉淀弧的特征与位置取决于抗原分子的大小、结构、扩散系数和浓度等。当抗原、抗体存在多种体系时，会出现多条沉淀弧。 二、沉淀反应 双向扩散法的操作：生理盐水配制1%-5%的琼脂，取4mL倒在普通载玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗体用于测定抗体效价，中心孔滴入抗体，外周孔滴入抗原，用于检测抗原的存在和定性抗原。 二、沉淀反应 抗原抗体为单一体系时，抗原浓度不同，沉淀弧的特征不同： 抗原抗体为多体系时，出现的沉淀弧有多条，彼此互不干扰。 4、单向免疫扩散：又称单向琼脂扩散，是定量抗原的一种检测方法。与双向扩散不同的是在琼脂中含有一定量的抗体，孔内加入未知量的相应抗原。在37度保温过程中，孔内的抗原向周围扩散，与抗体形成沉淀圈。根据沉淀圈的大小确定抗原的含量 二、沉淀反应 二、沉淀反应 另外还有其他众多的免疫检测技术和手段，其机理都利用了抗原抗体的沉淀反应。 例如微量免疫电泳、对流免疫电泳、火箭