实验二单因子实验.docVIP

班级：12级生物一班姓名：朱富军学号：20120322102 实验二普通果蝇的单因子实验 一：目的 理解分离定律的原理； 掌握果蝇的杂交技术； 3记录交配结果和掌握统计处理的方法。 二.原理 一对基因在杂合状态中保持相对的独立性，而在配子形成 时，又按原样分离到不同的配子中去。理论上配子分离比是1 :1， 子二代基因型分离比是1:2:1,若显性完全，子二代表型分离比 是3:1。这就是分离定律。 孟德尔从豌豆中选取了许多稳定的，易于观察的性状观察分 析。所谓的性状是生物体所表现的形态特征和生理特性的总称。 孟德尔在研宂豌豆等植物的性状遗传时，把植株所表现的性状总 体区分为各个单位作为研宄对象，这些被区分开的每一个具体性 状称为单位性状(unitcharacter).如豌豆的花色，种子形状， 子叶颜色，豆荚形状，未成熟豆荚的颜色，花序着生部位和株高 等性状。不同个体在单位性状上常有着各种不同的表现，如豌豆 有红花和白花，种子形状有圆粒和皱粒，子叶颜色有黄色和绿色 等。这种同一单位性状在不同个体间所表现出来的相对差异，称 为相对性状。 果蝇的长翅(+ )和残翅(vg)是一对相对性状。它们是位 于常染色体上的一对等位基因。野生型果蝇的双翅是长翅， (+/+)翅长过尾部。残翅果蝇(vg/vg)的双翅几乎没有，只 有少量残痕，无飞翔能力。vg的座位是第二染色体67.0。长翅 对残翅显性完全。交配方式：用长翅果蝇与残翅果蝇交配，得到 子一代都是长翅，子一代雌雄个体间相互交配，子二代产生性状 分离，出现两种表型，呈3:1之比。 现以长翅雌蝇与残翅雄蝇交配为例 P： 长翅(？)x残翅(J) +/+ 丄 vg/vg 配 3相互交 F2： 长翅 残 翅 (1 +/+, 2+ /vg) (1 vg/vg) FI 长翅+ /vg 三.材料与方法 1材料： 黑腹果蝉（Drosophila melanogaster ）的两个品系： 野生型：长翅果蝇（+ / +） 突变型：残翅果蝇（vg / vg） 野生型果蝇的双翅为长翅（+/+），翅长超过尾部。残翅果 蝇（vg /，g）的双翅几乎没有，只留少量残痕，无飞翔能力。 2方法 3. 2. 1仪器设备： 双筒解剖镜，天平，培养瓶，麻醉瓶，毛笔、白瓷板，放大镜， 棉花，镊子，大烧杯，电炉，玻璃棒，铁架台，漏斗，胶管，锥 形瓶。 3. 2. 2药品试剂： 乙醚、玉米粉、琼脂、葡萄糖、酵母粉、丙酸。 3. 2.3步骤 培养基的配制：4-5人为一组，按照所需的量配制相应的 培养基。现在以300ml为例，培养基的配方如下： A：葡萄糖23.45g,琼脂2.345g，加蒸馏水150ml，煮沸溶解。 B:玉米粉30.9375g,加水150ml，加热搅拌均匀后，在加 625g酵母粉。 将A和B混合加热成糊状后，加1. 875ml丙酸，即可分装到 培养瓶中。 每瓶分装30ml左右，将瓶壁擦拭干净后，用纸包扎好后即可 进行常压间隙灭菌，灭菌后在2到3天内未发生霉变，即可 用。 2、交配方式：用纯系残翅果蝇（雌），与长翅果蝇（雄） 交配，此为正交实验；反交实验以长翅果蜗为母本、残翅果蝇为 父本，正反交个两瓶，每瓶放四对，由此得F1代。F1代雌 雄个体相互交配，F2代出现性状分离，如下图 P 残翅（早）X长翅（各） +/+ vg/vg I F1 长翅（早、卷） +/vg F2 长翅、惨翅 3、挑选处女蝇。选野生型和残翅果蝇为亲本。因为将雌雄 果蝇放在一起培养，雌蝇的生殖器中有贮精囊，可保留交配所得 的大量精子，雌蝇一次交配所得的精子，足够它多次排出的卵受 精，因此在做杂交试验时，雌蝇必须选用处女蝇（没有交配过的 雌蝇）。一般来说，刚羽化出来的果蝇在12小时之内是不进 行交配的，所以在这段时间内选出的雌蝇即为处女蝇。为了保险 起见，可以在羽化后的8小时内挑选。因此，在杂交实验开始 的一段时间内，根据自己的实验设计，精心挑选处女蝇。为了操 作方便，可以在每天中午13 : 00?14 : 00将培养瓶内 的成蝇杀死，晚上21 : 00?22 : 00对新羽化出的果蝇 进行挑选。雌雄个体分开培养.残翅果蝇雌雄与长翅果蝇雌雄各 收集30只（正反交各两瓶，每瓶4只，每种用16只，因怕过度 麻醉导致死亡，故多放了 14只） 具体方法：首先把残翅处女蝇倒出麻醉，用左手小指与 无名指夹取麻醉瓶瓶塞。在瓶塞滴加数滴乙醚，使瓶口朝下倾斜 轻轻拍瓶壁，使之掉落培养皿中，挑30残翅果蝇（雌）、30 只残翅果蝇（雌）、30只残翅果蝇（雄）和30只残翅果蝇（雄） 分别移到四个培养瓶中，并对培养瓶贴好标签，注明是残翅还是 长翅，雌雄。 4、接种。 取残翅果蝇（雌）瓶，用左手小指与无名指夹取麻醉瓶瓶塞。 在瓶塞滴加数滴乙醚。半分钟左右，果蝇被麻醉，活动缓慢，注 意麻醉