当归补血汤对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究-中西医结合基础专业论文.docxVIP

成都中医药大学博士学位论文 成都中医药大学博士学位论文 中文摘要 目的：骨髓抑制是肿瘤患者放化疗后，骨髓造血功能损害为主的毒副作用。为 了更好地服务于临床，寻求降低放化疗毒副作用的中药复方制剂，本实验首次深 入全面地探讨了当归补血汤的配伍原则、补气益血的机制及不同剂型的当归补血 汤对造血机能的影响。 方法：应用造血祖细胞培养术、免疫组织化学、流式细胞术、蛋白免疫印迹法、 酶联免疫吸附法以及 RT-PCR 等技术，从骨髓造血微环境中的基质细胞、细胞外 基质、细胞因子对造血干细胞的影响着手，从信号转导的角度探讨补气益血的分 子学机制。为补气益血的中医理论提供实验室依据。 结果：1 当归补血汤能提高骨髓抑制小鼠外周血像、骨髓有核细胞数及造血干/ 祖细胞体外培养集落产率，能促使造血干/祖细胞进入细胞增殖周期。 2当归补血汤能改善骨髓抑制小鼠细胞因子的表达，尤其能有效调节 TPOmRNA的表达，促使血小板-TPOmRNA-TPO-TPOR达到自稳状态；同时还能提高骨 髓抑制小鼠G-CSFmRNA的表达，并呈量效正相关。 3 当归补血汤能增强骨髓抑制小鼠骨髓基质细胞的活性；并通过促进骨髓 基质中 FN、LN 的表达，抑制 MMP-2、MMP-7 的表达改善造血干/祖细胞的黏附和 归巢；同时增强骨髓基质中 IL-10 的表达，促进早期造血干/祖细胞的增殖。 4当归补血汤可上调骨髓抑制小鼠骨髓基质细胞及骨髓细胞TGF-β1及 Smad3信号蛋白的表达，其调节具有双向性。 5当归补血汤标准汤剂、整方颗粒（黄芪：当归=5：1、黄芪：当归=1：1）、 颗粒配方（黄芪：当归=5：1）均能改善骨髓抑制小鼠造血机能，但配方颗粒的 疗效似更佳。 结论：当归补血汤确能改善骨髓抑制小鼠的造血机能，其途径主要是通过改善 骨髓造血微环境中基质细胞、细胞外基质蛋白质的表达及细胞因子mRNA的表达来 调节造血干/祖细胞的增殖和分化；“补气益血” 的经典中医理论是有物质基础 的，TGF-β/Smad信号转导介导了补气益血的分子学机制；当归补血汤现代中药 配方颗粒在改善骨髓抑制小鼠造血功能方面，功效优于传统汤剂。 关键词：骨髓抑制 当归补血汤 造血微环境 信号转导 配方颗粒 1 1 Abstract Objective:Myelosuppression which caused the decrease in leukocyte-based toxicity symptoms by bone marrow damage is followed , when the cancer patients undergo radiotherapy and chemotherapy. In order to serve the clinical better, its necessary to seek a kind of drugs of herbal medications to lower the side effects of radiotherapy and chemotherapy. In this experiment, Jin Li Gaos Dang Gui Bu Xue Tang(DGBXT) is used to in-depth and comprehensive exploration of the principles of the parties, the mechanism of Buqi Yixue and the effect of different forms of DGBXT to hematopoietic Methods :For the purpose of providing laboratory basis of Chinese medicine theory, Hematopoietic progenitor cells in culture, immunohistochemistry, flow cytometry, Western blot assay, Enzyme- linked immunosorbent assay and RT-PCR technologies are used in this protocol to study the stromal cells, extracellular matrix of bone marrow micro-environment, and influence of Cytokines on hematopoietic stem cells, the role of signal transduction in the perspective of Buqi Yixu