缝隙连接蛋白Connexin26在小鼠耳蜗发育晚期中的作用研究-耳鼻咽喉科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 一、英文缩略词 ……………………………………………………………1 二、摘要 1.中文摘要 ……………………………………………………………3 2. 英文摘要…………………………………………………………… 6 三、前言 …………………………………………………………………10 四、论文正文 1.第一部分 出生后不同时间点 Connexin26 基因敲除小鼠模型的建立和鉴 定 ……………………………………………………………………………17 2.第二部分 出生后不同时间点 Connexin26 基因敲除小鼠耳蜗细胞长时程 损伤模式的研究 ……………………………………………………………34 3.第三部分 出生后早期 Connexin26 敲除小鼠耳蜗细胞损伤与葡萄糖转运 障碍的研究 …………………………………………………………………51 五、综述 Connexin26 与遗传性耳聋的研究进展…………………………63 六、附录 攻读学位期间发表的文章 ………………………………………73 七、致谢 ……………………………………………………………………74 华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 英文缩略词表 英文简称 英文全称 中文全称 ABR auditory brainstem response 听性脑干反应 Cx connexin 缝隙连接蛋白 OC TC organ of Corti tunnel of Corti Corti 器 Corti 隧道 HC hair cell 毛细胞 OHC outer hair cell 外毛细胞 IHC inner hair cell 内毛细胞 SC supporting cell 支持细胞 PC pillar cell 柱细胞 TMX tamoxifen 他莫昔芬 SV striae vascularis 血管纹 SL spiral ligament 螺旋韧带 WB western blot 蛋白印记计数 mRNA messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸（信使 RNA） qRT-PCR SGC quantitative real time PCR spiral ganglion cell 实时定量 PCR 螺旋神经节细胞 SG spiral ganglion 螺旋神经节 Hz Hertz 赫兹 SPL sound pressure level 声压级 GLUT glucose transporter 葡萄糖转运子 KD knock down 敲除 AMPK Adenosine 5‘-monophosphate-activated AMP 依赖蛋白激酶 protein kinase PMSF SDS Tris-Base HE DAPI EDTA phenylmethanesulfonyl fluoride sodium dodecyl sulfate tris (hydroxymethyl) methyl aminomethane hematoxylin and eosin 4,6-diamidino-2-phenylindole Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 苯甲基磺酰氟 十二烷基硫酸钠 三羟甲基氨基甲烷 苏木素伊红 4,6-二脒基-2-苯基吲哚 乙二胺四乙酸 缝隙连接蛋白Connexin26在小鼠耳蜗发育晚期中的作用研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科 研究生：陈 森 导 师：孔维佳 教授 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻喉科 中文摘要 第一部分 出生后不同时间点 Connexin26 基因敲除小鼠模型的建立和鉴定 目的：建立及鉴定出生后不同时间点 Connexin26 基因敲除小鼠模型。 方法：通过遗传学手段，将 Cx26loxp/loxp 转基因小鼠与工具鼠 Rosa26CreER 杂交获 得 Cx26loxp/WT;Rosa26CreER 子一 代小 鼠。子 一 代小鼠 相互交 配，获 得 Cx26loxp/loxp; Rosa26CreER 子二代小鼠。分别在上述子二代小鼠出生后第 1 天 (P1)，第 6 天 (P6)和 第 12 天 (P12) 给予颈背部单次皮下他莫昔芬 (tamoxifen，TMX) 注射，获得出生后 不同时间点 Connexin26 基因敲除小鼠模型。使用基因分型 (genotyping)、蛋白印记 (Western Blot) 和免疫荧光技术检测小鼠的基因背景和蛋白敲除情况。使用听性脑干 反应（auditory brainstem responses，AB