缝隙连接在长QT综合征室性心律失常发生中的作用及其机制研究-内科学(心血管)专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 早期后除极（EAD），R-on-T 期前收缩，尖端扭转性室速（TdP）。与正常组相比较， LQT3 组中 10/10 产生 EAD，10/10 产生 R-on-T 期前收缩(P 0.001)。LQT3 组有 5/10 出现自发性 TdP (P = 0.033)，9/10 诱发出 TdP (P 0.001)。与 LQT3 组相比较， AAP-500nM 干预组的 QT 间期以及 TDR 显著缩短（均 P 0.001）。AAP-500nM 干预 组的早期后除极（EAD），R-on-T 期前收缩，尖端扭转性室速（TdP）发生率显著小 于 LQT3 组(P=0.003, P=0.001, P=0.02)，AAP-500nM 干预组伴随 Cx43 去磷酸化水平 降低（P 0.001）。 结论：缝隙连接激动剂 AAP10 防止 Cx43 去磷酸化，减少了兔 LQT3 模型的跨室 壁复极离散度和心律失常发生率，说明兔 LQT3 模型的缝隙连接可能参与了跨室壁复 极离散度的形成。 第二部分 抗心律失常肽对犬 LQT2 模型缝隙连接重构和 室性心律失常的影响 目的：跨室壁复极离散度（transmural dispersion of repolarization，TDR）的增加 可导致长 QT 综合征心律失常的发生。心肌细胞的缝隙连接也参与了跨室壁复极离散 度的形成和维持。本实验研究了缝隙连接激动剂抗心律失常肽(AAP10)，对犬 LQT2 模型缝隙连接磷酸化，以及室性心律失常的影响并探讨其作用机制。 方法：应用心肌细胞 IKr 通道阻断剂 d-sotalol (100 μM, Sigma, St. Louis, MO, USA) 在犬左室楔型心肌块建立 LQT2 模型。抗心律失常肽 AAP10 (缝隙连接激动剂，Chinese Peptide Co., Hangzhou, Zhejiang, China) 用于增加心肌细胞间缝隙连接耦连。采用浮置 玻璃微电极法同步记录心内膜、中层（M 细胞）和心外膜心肌细胞跨膜动作电位及跨 室壁心电图。免疫印迹法（Western blot）检测心肌细胞缝隙连接蛋白 43 (Connexin43 , Cx43)总的 Cx43 和去磷酸化 Cx43 水平的变化。应用荧光免疫组化技术检测上述各组 心肌细胞缝隙连接蛋白 Cx43 表达、空间分布和磷酸化水平的改变。 基础步长 1000 ms 起搏 1 小时（电生理稳定），药物均溶解于台氏液，通过左室 楔型心肌组织块冠状动脉插管灌流。随机分为正常组、LQT2 组和 AAP10 干预组：正 常组（n=10）灌流正常台式液、LQT2 组（n=10）灌流含 100 μM d-sotalol 的台式液、 AAP10 干预组（n=10）灌流含 100 μM d-sotalol 和 500 nM AAP10 的台式液。 在基础状态、AAP10 预处理阶段和灌流 d-sotalol 阶段，观察并记录左室楔型心肌 组织块自发性心律失常，以及程序刺激诱发的左室楔型心肌组织块心律失常。QT 间 期为起搏信号到 T 波下降支与基线交叉点间的距离；动作电位复极 90%时程(APD90) 为动作电位 0 期到复极至 90%振幅的时程；TDR 为同一心搏 M 细胞和心外膜复极时 间差值。 结果：正常组没有发生尖端扭转性室速（TdP）。与正常组相比较，LQT2 组 QT 间期和跨室壁复极离散度（TDR）显著增大，LQT2 组尖端扭转性室速（TdP）发生 率也显著高于正常组。与正常组相比较，LQT2 组有 4/10 出现自发性 TdP (P = 0.087)， 7/10 诱发出 TdP (P 0.05)。LQT2 组同时伴有去磷酸化 Cx43 水平增高（均 P 0.001）。 与 LQT2 组相比较，AAP-500nM 干预组 QT 间期和 TDR 显著缩短（均 P 0.001）。 AAP-500nM 干预组 TdP 的发生率显著小于 LQT2 组(P 0.05)，并伴随去磷酸化 Cx43 水平降低（P 0.001）。 结论：缝隙连接激动剂 AAP10 防止 Cx43 去磷酸化，减少了犬 LQT2 模型的跨室 壁复极离散度和心律失常发生率，说明犬 LQT2 模型的缝隙连接可能参与了跨室壁复 极离散度的形成。 关键词：长 QT 综合征，缝隙连接，连接蛋白 43，抗心律失常肽，跨室壁复极离 散度，动作电位时程 Role of Gap Junction in Ventricular Arrhythmias of Long QT Syndrome Department of Gerontology, T