钙离子通道在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用-生理学专业论文.docxVIP

安徽 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 摘要 1 STIM 1 和 Orai 1 在老年大鼠肾小球系膜细胞增殖减弱 中的作用 背景 钙库调控钙内流（Store-operated Ca2+ entry, SOCE）是一个普遍存在的调节钙 离子进入到细胞内的机制，参与包括细胞增殖在内的众多生物学过程。基质相互 作用分子 1（Stromal interaction molecule 1, STIM 1）蛋白和 Orai 1 蛋白是 SOCE 的 主要组成部分。肾小球系膜细胞（Glomerular mesangial cells, GMCs）参与肾小球 滤过率的调节。从临床角度来看，许多生理学功能随着老龄化都会发生改变。 目的 探讨 SOCE 在老年大鼠肾小球系膜细胞中的变化和对增殖的作用。 方法 1 年轻和老年大鼠 GMCs 中的 SOCE 原代培养年轻（3 月龄）和老年（22 月龄）大鼠 GMCs，通过激动剂引起内钙 释放、激活 SOCE，利用 Leica TCS SP5 激光共聚焦系统检测细胞内钙离子浓度的 变化。 2 STIM 1 和 Orai 1 在年轻和老年大鼠肾小球中的表达 使用 Western Blot 及免疫荧光方法分别检测 STIM1 和 Orai1 在年轻和老年大鼠 肾小球中的表达水平。 3 STIM 1 和 Orai 1 在大鼠 GMCs 的 SOCE 中的作用 将 STIM 1 siRNA、Orai 1 siRNA 分别转染到原代培养的年轻大鼠 GMCs 中， 利用 Leica TCS SP5 激光共聚焦系统检测细胞内钙离子浓度的变化。原代培养年轻 和老年大鼠 GMCs，采用免疫荧光方法检测钙库耗竭介导的 STIM 1 和 Orai 1 聚集 斑点形成。 4 老年大鼠 GMCs 的增殖能力及其机制 使用 MTT 及 BrdU 分析方法分别检测年轻和老年大鼠 GMCs 的增殖能力，转 染 STIM 1 siRNA、Orai 1 siRNA 原代培养的年轻大鼠 GMCs 的增殖能力。 结果 1. 与年轻大鼠相比，在老年大鼠 GMCs 中，激动剂引起的 SOCE 明显减弱。 2. 与年轻大鼠相比，STIM 1 和 Orai 1 在老年大鼠肾小球中的表达明显减少。 3. 转染 STIM 1 siRNA、Orai 1 siRNA 原代培养年轻大鼠 GMCs 的 SOCE 明显减 弱。 4. 在年轻大鼠 GMCs 中，钙库耗竭明显诱导了 STIM 1 和 Orai 1 聚集斑点的形成。 5. 与年轻大鼠相比，老年大鼠 GMCs 中 STIM 1 和 Orai 1 聚集斑点的形成明显减 弱。 6. 与年轻大鼠相比，老年大鼠 GMCs 的增殖能力明显减弱。 7. 转染 STIM 1 siRNA、Orai 1 siRNA 原代培养年轻大鼠 GMCs 的增殖能力明显 减弱。 结论 STIM 1 和 Orai 1 表达减少导致的 SOCE 降低是老年大鼠 GMCs 增殖减弱的原 因之一。 关键词 老龄化 STIM1 Orai1 肾小球系膜细胞 增殖 ABSTRACT 1 The Role of STIM 1 and Orai 1 on Attenuated Mesangial Cell Proliferation in Aged Rats Background Store-operated Ca2+ entry (SOCE) is a common mechanism to regulate Ca2+ influx into cells and participates in many biological processes including cell proliferation. STIM 1 protein and Orai 1 protein are important components of SOCE. Glomerular mesangial cells (GMCs) involve in the regulation of the glomerular filtration rate. From a clinical point of view, many physiological functions will change with aging. Objective To investigate the role of SOCE in mesangial cell proliferation in aged rats and the mechanism. Methods SOCE in GMCs of young and aged rats SOCE was activated