新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程.doc.docVIP

新城疫冻干疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。注明收获日期,毒种代数等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度 的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获 鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥108EID50。 1.2.2 纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染，分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过1年。 1.4 毒种继代 应不超过3代。 2 制苗材料选择 选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。 3 制苗用毒液的制备 3.1接种 取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml，接种后密封针孔，置36~37℃继续孵育，不必翻蛋。 3.2 孵育和观察 鸡胚接种后,每日照蛋一次，将在60小时前死亡的鸡胚弃去。60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。 3.3 收获 将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳，剪开尿囊膜，吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。收获后的胚液置于灭菌瓶中，作好标识，留样后，结冻保存。 在收获胚液的同时, 应逐个检查鸡胚, 如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用。 4 半成品检验 4.1 无菌检验 经处理过的胚液,每组分别取样,按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行无菌检验,应无细菌生长。 4.2 病毒含量测定 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释，取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，置36~37℃继续孵育，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚随时取出，收获鸡胚液，同一稀释度的胚液等量混合，按稀释度分别测定红细胞凝集价，至120小时，取出所有活胚,逐个收获鸡胚液，分别测定红细胞凝集价，凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染，计算EID50，每0.1 ml病毒含量107EID50者可用于配制疫苗。 5 配苗及分装 将检验合格的若干组鸡胚液滤过,混合于同一容器内,按规定羽份,加一定比例的蔗糖脱脂奶粉作稳定剂,使其最终蔗糖含量为2.5%，脱脂奶粉含量为5%，同时加入适宜的抗生素,充分摇匀,定量分装,每羽份病毒含量应≥106EID50。分装后迅速进行冷冻真空干燥。 6 成品检验 6.1 物理性状 6. 6. 6. 6.2 无菌检验 按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行，如有菌生长，应进行杂菌计数，并作病原性鉴定（按《杂菌计数和病原性鉴定操作细则》进行）和禽沙门氏菌检验每羽份非病原菌数应不超过1个（按《禽沙门氏菌检验法》进行）。 6.3 支原体检验 按《支原体检验法》进行，应无支原体生长。 6.4 鉴别检验 6.4.1 6.4.2 将疫苗用无菌生理盐水稀释至105.0EID50 6.4.3 将接种后鸡胚用石蜡封孔后，置37℃ 6.5 外源病毒检验 按《外源病毒检验法》进行。 6.6 安全检验 下列方法任择其一。 6.6.1 6.6.2 6.7 效力检验 下列方法任择其一。 6.7.1 6.7.1 6.7.1.2 疫苗稀释 将疫苗按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释至1羽份/0.1mL，再作10倍系列稀释至10-7 6.7.1.3 接种 分别取10-7、10-6、10-5 6.7.1.4 孵育 置37℃继续孵育至120小时，每天上、下午各照检1次，48小时以前死亡的鸡胚弃去不计，在48~120小时死亡的鸡胚，随时取出放在2~8℃冰箱中，至120小时取出全部活胚放在2~8℃ 6.7.1.5 凝