谷氨酰胺合成酶在固氮鱼腥藻固氮调节中的作用术.PDFVIP

维普资讯 第 11卷 第4期 水 生 生 物 学 报 Vo1．1l，No．4 1987年 12月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Dec．，1987 谷氨酰胺合成酶在固氮鱼腥藻 固氮调节 中的作用术 戴玲芬 何慧 林惠民 (中国科学院水生生物研究所，武汉) 提 要 在MSX(methloninesulfoximine，谷氨酰胺合成酶的不可逆抑制剂)存在下，固氮鱼腥藻 (Anabaenaazotica)所分泌的氨量和谷氨酰胺合成酶 (Gs)活力有较好的负相关性，证明谷氨 酰胺合成酶一谷氨酸合成酶 (Gs—G0GAT)是固氮鱼腥藻氨同化的重要途径。在蛋白质合成 受到氯霉素拟制时，NH+对固氮酶的失活是迅速的，同时GS活力有较大下降，表明NH+的 调控酶的失活或降解。在氮固定条件下，固氮酶活力半衰期小于4小时，Gs活力半衰期大于 10小时，则 GS并不是固氮酶的正调节因子。NH+和谷氨酰胺 (gln)对固氮酶的失活作用 随它的浓度增加而提高，但 GS并没有这种相关性，低浓度NH+(0．1—0．5mmol／L·NH．c0 对Gs活力没有抑制作用，高浓度gln(1．0—2．Ommol／L)也没有抑制GS活力，说明Gs并 不直接调控固氮酶。MSX能消除NH：和 gln对固氮酶的抑制作用，并与藻龄有关。 关键词 固氮鱼腥藻，固氮酶调节，MSX，谷氨酰胺合成酶 在固氮生物中，普遍存在着结合态氨对固氨酶合成的阻抑作用，NHt对固氮肺炎克 氏杆菌 (Klebsiel1)和其他革兰氏阴性菌固氮酶的可逆失活作用，是通过NHt的浓度变 化来调节GS的腺苷酰化／脱腺苷酰化之间的相互转化，并由此而“开关”固氮基因，有报 道认为氨对荚膜红假单孢菌 (R五DD “DD，~apsulata)固氮酶活性的抑制程度与氨 对GS活性的抑制程度有很好的相关性跚。而Alef等跚发现在沼泽红假单孢菌 (Rhodo． pseudomonaspalustris)的氮饥饿细胞中，GS呈腺苷酰化状态，而固氮酶没有关闭，表明 固氮酶的关闭并不依赖于GS的腺苷酰化作用，这使固氮酶调节更为复杂化了。 固氮蓝藻的细胞壁性质属于革兰氏阴性，迄今为止，在固氮蓝藻中尚未发现GS活力 是由腺苷酰化／脱腺苷酰化的相互转化来调节的 ～，固氮蓝藻中，到底有哪些调控固氮酶 的因子，说法颇多，而GS在固氮酶调控中起什么作用却没有详细的报道，我们想通过对 固氮鱼腥藻的研究来探讨这些问题。 材 料 和 方 法 固氮鱼腥藻 (Anabaenaazotica)是本研究室藻种库提供。 藻从斜面接入 100ml三 ·本文研究课题为国家基金资助项目的一部分；本文经黎尚豪教授审阅表示感谢。 1986年9月2日收到。 维普资讯 4期 戴玲芬等：谷氨酰胺合成酶在固氮鱼腥藻固氮调节中的作用 345 角锥瓶，培养7天后转接至2500ml的三角锥瓶，继续培养3天后供实验用。培养基为水 生111，光强2O00—30001x，温度为30℃。 GS的转移酶活性测定采用 Sampaio等方法n∞：取O．5ml样品加入1．0ml反应混合 液中 (1．0ml反应混合液含40mmol／LTris-HC1缓冲液 (pH 7．O)；3mmol／L氯化锰； 20mmol／L砷酸钾；O．4mmol／LADP-Na；60mmol／L羟胺；30mmol／L谷氨酰胺)， 置于37~(3水浴10分钟(反应在黑暗中进行)，反应完毕加O．5ml终止液 (1O％Fec140ml； 24％三氯乙酸 1．0ml；6mol／L[1／2HC1]O．5ml；H：06．5ml混合而成)，离心5分钟 (2000 转／分)去沉淀，用分光光度计(上海第三分析仪器厂721型)测定上清液 OD，帅处的数值， 使用谷氨酰