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应用大孔树脂分离纯化枸杞叶总黄酮的研究 第26卷第2期 Vo1.26NO.2 宁夏大学(自然科学版) JournalofNingxiaUniversity(NaturalScienceEdition) 2005年6月 Jun.2005 文章编号:0253—2328(2005)02一O148—03 应用大孔树脂分离纯化枸杞叶总黄酮的研究 雍晓静,刘钢,张境 (宁夏大学化学化工学院,宁夏银川750021) 摘要:研究了用大孔树脂分离纯化枸杞叶总黄酮的工艺,为枸杞的综合利用和开发提供了实验依据.采用 HPD1OO型,HPD7OO型,AB8型和NKA一9型4种大孔树脂对枸杞叶总黄酮进行富集纯化,用分光光度法进行 定量,以总黄酮的吸附量,含量及回收率为指标进行综合评价,结果表明,HPD1OO型大孔树脂对枸杞叶总黄酮有 良好的吸附分离性能. 关键词:大孔树脂;枸杞叶;总黄酮;分离纯化 分类号:(中图)069文献标志码:A 枸杞(Lyciumchinense)俗称天精草,《本草纲 目》中称枸杞叶有”除烦益志,补五劳七伤,壮心气, 除热毒,散疮肿,除风明目”之功效.枸杞叶总黄酮含 量较高,其具有保护心脑血管,利胆保肝,抗癌等多 种生物活性].大孔树脂是一种新型高效的分离 纯化材料,其原理是选择性吸附中药及其复方的有 效成分,从而达到提取精制的目的.该工艺在树脂类 型的选择及其质量控制,吸附分离的生产工艺及操 作规范等方面存在诸多不足],对具体分离物要 选择合适的树脂.本文对HPD100型,HPD700型, AB一8型和NKA一9型4种大孔树脂分离纯化枸杞 叶总黄酮的生产工艺及效果进行了比较,发现HPD系 列树脂更适于分离枸杞叶总黄酮,尤其是HPD100型. 1实验仪器,材料及试剂 UV一245O型紫外可见分光光度计(日本岛津 公司),PHS一3C型pH计(上海雷磁仪器厂).芦丁 由中国药品生物制品鉴定所提供,HPD100型, HPD700型树脂由河北沧州宝恩化工有限公司提 供,AB一8型和NKA一9型树脂由天津南开大学化 工厂提供,实验所用试剂均为分析纯.枸杞叶于 2003年秋季采自宁夏银川郊区. 2实验方法及结果 2.1样品液的制备 称取100g枸杞叶,于800mL一95的乙醇 溶液中室温浸提24h,重复3次,合并滤液.减压回 收溶剂至近干,用石油醚除去色素类杂质,然后用蒸 馏水溶解,以石灰乳调至pH一9.煮沸10min,趁热 过滤,重复操作3次,合并滤液,用HC1调节pH一5, 得枸杞叶样品液. 2.2总黄酮含量的测定 准确称取芦丁标准品25mg,用一7O的乙醇溶 解并定容于50mL容量瓶中,得0.5g/i的对照品 溶液.精密量取该对照品溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5, 3.0mL于25mL容量瓶中,分别加入3mL0.1mol/I C1.的乙醇溶液后,再加入5mL1mol/LNaAc水溶 液,用—7O的乙醇定容至刻度,摇匀后每隔5min在 410nm处测定吸光度,以0mL样品液为参比,发现显 色35min时吸光度趋于稳定且最大.因此,本文采用 40n时的显色数据_6],绘制标准曲线(图1).计算得回 归方程A—O.04343+29c,r=0.9994. 0.O000l0.020标准样品浓度c/(g?L1 图l芦丁标准曲线 量取3mL枸杞叶样品液于50m1容量瓶中,加入 3mL0.1mol/LA1C1.的乙醇溶液后,再加入5mL 1mol/LNaAc水溶液,用一7O的乙醇定容,放置 收稿日期:2004—06—07 作者简介:雍晓静(1978一),女,硕士研究生,研究分离科学与技术. 6420864202 ●●●10O0000 第2期雍晓静等:应用大孔树脂分离纯化枸杞叶总黄酮的研究149 40rain时用外标法测定总黄酮的含量为12. 2.3树脂的预处理 将4种树脂溶胀后用乙醇湿法装柱,以—95 的乙醇洗柱,不时检查流出的乙醇液,将乙醇液与水 以1:5的体积比?昆合,振摇至不显白色浑浊时停止 洗柱:,用蒸馏水将柱中树脂洗至无醇味后备用. 2.4树脂的筛选及吸附工艺的研究结果 2.4.1不同树脂的静态吸附实验分别取5mL2.3 中处理的4种树脂,将其置于2OmI具塞试管内,加 枸杞叶样品液10mI,每隔10rain振摇1次,连续5 次后,静置24h.分别吸取上清液1.5mI,置于25mI 容量瓶内,依照2.2中方法显色并定容,用外标法测 定总黄酮的含量,结果如表1所示. 表14种树脂静态吸附的测定结果g/I 2.4.2不同树脂的静态吸附一洗脱性能实验将 2.3中处理的树脂装柱(1cm×25cm),以一70 的乙醇洗脱,以FeC1醇液浸泡过的硅胶薄板跟踪, 检验是否洗脱完全.将洗脱液各取1.5mI定容于 25mL容