转基因动物探究技术思路.docVIP

转基因动物探究技术思路 从转基因动物研究的目的出发，探讨转基因动物研 究的不同思路，分析使用各种载体所考虑的基本出发点，说 明受体动物遴选所需要考虑的因素，总结了转基因方法的技 术特点，提出转基因动物检测手段的设计原则，论述了转基 因动物繁殖的必要性，为从事转基因动物方面的研究提供技 术思路。 关键词：转基因动物；转基因方法；技术思路 Q789 A 0439-8114 (2012) 21-4837-04 Technology Program of Transgenic Animal LIU Xi-mei， QIAO Xian-feng, ZHANG Li-ping， CHENG Ni, BI Yan-zhen, LI Li, XIAO Hong-wei, HUA Zai-dong, HUA Wen-jun (Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine ， Hubei Academy of Agricultural Sciences /Hubei Key Lab of Animal Embryo and Molecular Breeding, Wuhan 430064， China) Abstract： Different thoughts on the research of transgenic animal were discussed. It included the basic starting point and factors need to considered in the selection of various carriers and recipient animals, the summary of transgenic techniques， the design principles for transgenic animal detection ， the necessity of transgenic animal breeding， etc. It provided a technical idea for the research of transgenic animals. Key words : transgenic animal ； transgenic technology； technical idea 转基因动物制备的主要技术步骤包括目的基因的分离 与克隆；表迗载体的构建；受体细胞的获得；基因导入；受 体动物的选择及转基因胚胎的移植；转基因整合表达的检 测；转基因动物的性能观测及转基因表达产物的分离与纯 化；转基因动物的遗传性能研究以及性能选育；组建转基 动物新类群等。30多年的转基因动物研究历程［1］，转基因 技术日新月异，转基因动物的品种多种多样，转导的基因五 花八门，涉及的领域超乎想象，遇到的问题层出不穷、千奇 百怪。人们从初期的兴奋、中期的热血沸腾到现阶段的冷静 思考，研究成果正步步趋近我们的生活。然而，在转基因动 物研究中总会遇到这样或那样的一系列棘手问题，有时因初 始设计的缺陷，研究项目到中后期才察觉问题的严重性而不 得不终止对该项目的研究，这是该类研究进入产业化艰难的 重要原因之一 ［2］。为了省时省力，少走弯路，避免造成人 力、物力、财力的巨大浪费，应选择正确的设计思路、运用 得当的方法，才能较好地完成转基因动物研究工作。在此就 转基因动物研究的技术思路进行探讨，以供参考。 1研究的目的 转基因动物研究及应用的目的决定其研究的总体方向， 无论是以军用还是民用发展为目的，转基因动物研究总体可 分为五大类型，即动物育种、动物生物反应器、观赏宠物、 医学模型、基因功能研究等。不同类型的转基因动物研究的 技术思路不尽相同。 1.1动物育种类 转基因动物育种，特别是供应消费者肉、奶、蛋等之类 的动物如牛、猪、鸡、鱼等的转基因动物育种，其优先技术 思路是无标记基因，如绿色荧光蛋白（GFP）、红色荧光蛋白 （RFP）、卡那霉素抗性（kan）、病毒载体骨架及相关的DNA 片段等，这主要是考虑到产品的安全性评价问题，一旦带有 这类标记的动物形成，清除标记是非常费劲的工作，难以通 过安全性评价。如带有氨苄青霉素（amp）的转基因动物抗 药性增加、带GFP的转基因动物过敏原增加；其次还需考虑 基因功能如何发挥，如用促生长、抗病、环保、军用（蜘蛛 丝蛋白防弹衣）的基因，动物的生长极限、育种进度能否跟 上病原进化的速度，环保及军用产品的比较效益等，如抗疯 牛病的转基因牛（敲除朊病毒蛋白基因的牛）的研究进程没 有疯牛病病毒基因的变异快，将来培育的这种转基因牛品种 （10?15年后）无法确定能抗疯牛病［3］;再者是考虑转基 因