规范《DBS13001-2015-食品安全地方标准食品中诺如病毒检测》.pdfVIP

DBS13 河 北 省 地 方 标 准 DBS13/001—2015 食品安全地方标准 食品中诺如病毒检测 2015-04-23发布 2015-05-01实施 河北省卫生和计划生育委员会 发布 DBS13/001—2015 前   言 本标准按GB/T1.1-2009规定的格式编写。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。 本标准于2015年4月23日首次发布。 I DBS13/001—2015 食品安全地方标准 食品中诺如病毒检测 1 范围 本标准规定了贝类、生食叶类蔬菜和包装饮用水等食品中诺如病毒普通RT-PCR和实时荧光RT-PCR 检测方法。 本标准适用于贝类、生食叶类蔬菜和包装饮用水等食品中ＧⅠ型和ＧⅡ型诺如病毒的检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 诺如病 norovirus 诺如病毒属于人类杯状病毒科，诺如病毒属，是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺 如病毒直径约为26nm～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称。诺如病毒基因组是单股正 链RNA，组成长约7kb～7.5kb，电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，诺如病毒是具 有典型的羽状边缘、表面有凹痕的小圆状结构病毒。诺如病毒共可分为ＧⅠ～ＧⅤ ５个基因型，其中 感染人的主要是ＧⅠ型和ＧⅡ型。 3 设备和材料 3.1 电子天平：感量0.1g。 3.2 组织匀浆器或其他可以破碎样品的工具。 3.3 普通冰箱：2℃～8℃。 3.4 超低温冰箱：-80℃±5℃。 3.5 高速冷冻离心机：最大离心力大于15000g。 3.6 恒温水浴箱或金属浴：37℃～65℃。 3.7 PCR扩增仪。 3.8 实时荧光PCR扩增仪。 3.9 电泳仪。 3.10 凝胶成像系统。 3.11 震荡混匀器。 3.12 电热干燥箱。 1 DBS13/001—2015 3.13 pH计。 3.14 水过滤系统。 3.15 微量可调移液器：1μL～10μL、10μL～100μL、100μL～1000μL。 3.16 洗耳球或电动移液器。 3.17 无RNA酶的玻璃容器、微量加样器吸头、无菌50mL离心管、无菌1.5mL离心管和PCR管。 3.18 无RNA酶的一次性移液管：10mL、25mL。 3.19 混合硝酸纤维素膜：孔径0.22μm。 4 试剂 除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯。 4.1 无RNA酶的超纯水：见附录A.1。 4.2 甘氨酸缓冲液：见附录A.2。 4.3 5X PEG8000溶液：见附录A.3。 4.4 2.5mol/L氯化镁(MgCl)溶液：见附录A.4。2 4.5 牛肉膏-甘氨酸洗脱液:见附录A.5。 4.6 氯仿。 4.7 1mol/L盐酸溶液。 4.8 1mol/L 氢氧化钠溶液。 4.9 病毒RNA提取试剂盒。 4.10