橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化-中国农学通报.PDF

中国农学通报 2011,27(27):239-244 Chinese Agricultural Science Bulletin 橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化 1,2 3 2 2 2 2 李若霖 ，崔百明 ，王 颖 ，张秀春 ，陈雄庭 ，吴坤鑫 1 （海南大学农学院，海南儋州571737； 2 中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带生物技术重点开放实验室，海口571101； 3 石河子大学生命科学学院，新疆石河子832003） 摘 要：为探索适合橡胶草基因组DNA 的提取方法和RAPD 反应体系。采用改良CTAB 法提取橡胶草 叶片总DNA ，得到的DNA 能满足RAPD 分析需要。通过单因子实验法分析DNA 浓度、引物浓度、dNTPs 浓度、Taq 聚合酶以及Mg2+ 浓度对RAPD 扩增结果的影响，建立了适合于橡胶草RAPD 分子标记的最佳反 应体系，即20 μL 体系中包括：模板DNA 30 ng、Taq DNA 聚合酶1.75 U、dNTPs 浓度0.25 mmol/L、Mg2+ 浓 度2.0 mmol/L 、引物浓度0.5 μmol/L、10×PCR Buffer 2.0 μL 。RAPD 扩增反应程序为：94℃预变性5 min ， 94℃30 s ，37℃30 s ，72℃70 s ，45 个循环，最后72℃延伸7 min 。该反应体系具有较好的稳定性及可重复 性。 关键词：橡胶草；DNA 提取；RAPD ；反应体系 中图分类号：S576 文献标志码：A 论文编号：2011-2289 ExtractionofGenomicDNAandOptimizationofRAPDReactionofTaraxacumkok-saghyzRodin 1,2 3 2 2 2 2 LiRuolin ,CuiBaiming ,WangYing,ZhangXiuchun,ChenXiongting,WuKunxin 1 2 (College of Agronomy, Hainan University,DanzhouHainan571737; Institute of Tropical Biosciences and Biotechnology /Ministry of Agriculture Key Biotechnology Laboratory of Tropical Crops ,Haikou571101; 3College of Life Science, Shihezi University,ShiheziXinjiang832003) Abstract: The purpose of this study was to obtain the best method for extracting genomic DNA from Taraxacum kok-saghyz Rodin andtoestablishthebestreactionconditionof the RAPDamplificationsystem. ThehighqualitygenomicDNAof Taraxacum kok-saghyz Rodincouldbeobtainedfrom