氯化钴模拟法构建骨骼肌细胞缺氧模型-中国医科大学学报.PDF

中国医科大学学报 第43卷 第3期 2014年3月 JournalofChinaMedicalUniversity Vol.43 No.3 Mar.2014 ·265 · ·技术方法 · 氯化钴模拟法构建骨骼肌细胞缺氧模型 李晰，辛世杰，王磊，宋泽，荆玉辰，曹辉，段志泉，张健 （中国医科大学附属第一医院普外教研室血管甲状腺外科，沈阳 110001） 摘要 目的 观察CoCl 对体外培养的原代骨骼肌细胞的影响，探讨合理的体外化学模拟低氧模式。方法 利用组织贴块法 2 培养并鉴定原代骨骼肌细胞，给予CoCl 处理，观察不同时间和浓度细胞凋亡情况，以及通过免疫印迹及实时定量聚合酶链反应 2 检测低氧诱导因子1α（HIF⁃1α）、BAX 的表达变化情况。结果 与对照组比较，CoCl 处理组的细胞存活率明显下降（P 0.05 ）， 2 凋亡率明显增加（P 0.05 ），且骨骼肌细胞存活率下降程度及细胞凋亡率增加程度均随着氯化钴浓度增加时间延长而升高。 HIF⁃1α、BAX 蛋白水平亦随CoCl 浓度升高和时间延长而增加。结论 CoCl 对原代骨骼肌细胞的增殖凋亡及相关基因的表达 2 2 成呈时间和浓度依赖性，成功建立起一种体外培养原代骨骼肌细胞缺氧诱导模型，可以作为体外研究骨骼肌缺血缺氧的良好 模型。 关键词 氯化钴；骨骼肌细胞；凋亡；低氧诱导因子1α 中图分类号 R654.3 文献标志码 A 文章编号 0258-4646 （2014 ）03-0265-04 网络出版地址 Construction of a New Model for Skeletal Muscle Cell Hypoxia Using Cobalt Chloride LI Xi ，XIN Shi⁃jie ，WANG Lei ，SONG Ze ，JING Yu⁃chen ，CAO Hui ，DUAN Zhi⁃quan ，ZHANG Jian （Department of Vascular and Thyroid Surgery ，General Surgery Department ，The First Hospital ，China Medical University ，Shenyang 110001，China） Abstract Objective To investigate the effect of cobalt chloride on primary cultured skeletal muscle cells and explore the reasonable strategy of simulation chemical hypoxia by using CoCl . Methods Primary skeletal muscle cells were isolated and cultured via tissue explants adhesion meth⁃ 2 od ，and identified by immunofluorescence assay. Cells were then incubated with different concentration of cobalt chloride for different time length ， and the cell apoptosis was detected respectively. Immunoblotting and qRT⁃PCR were used to determine the mRNA and protein levels of HIF⁃1αand B