环境高风险区环境样品污染物去甲基化表观遗传毒性研究-公共卫生专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 英 文 缩 略 词 表 Abbreviation 序号 英文简称 英文全称 中文名称 QDMP The novel quantitation method for the demethylation potential of chemical pollutants 去甲基化表观遗传毒性定 量评价 5mC 5-methylated cytosine 5-甲基胞嘧啶脱氧核苷酸 CpG The cytosine and guanine dinucleotide 二核苷酸胞嘧啶 DNA-MTase DNA methylase DNA 甲基化酶 MBD Methyl-CpG binding domain 甲基化 CpG 位点结合域 Dnmt1 DNA methyltransferase DNA 甲基转移酶 5-AZA-CdR 5-Aza-2-deoxycytidine,5-AZA-dc 5-氮-2’-脱氧胞苷 MSP Methylation-Specific PCR 甲基化特异性 PCR 法 ROS Reactive oxygen species 活性氧自由基 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 ML Methylation levles 甲基化水平 EGFP Enhance Green fluorescent protein 增强型绿色荧光蛋白 GFP Green fluorescent protein 绿色荧光蛋白 HepG-2 Human hepatocellular liver carcinoma cell lin ICP/MS Inductively coupled plasma mass spectrometry 人肝癌细胞株 电 感 耦 合 等 离 子 体 质 谱 法 环境高风险区环境样品污染物去甲基化 表观遗传毒性研究 中文摘要 目的：对化学物去甲基化表观遗传毒性QDMP评价方法进行性能测试，应用此方法 定量评价某环境高风险区环境样品的去甲化表观遗传毒性，并探索影响环境样品 表观遗传毒性大小的主要成分。 方法：将pEGFP-C3质粒人工甲基化处理，处理后的C3质粒荧光蛋白基因启动子区 处于高甲基化状态，随后将该质粒转染进人类HepG-2肝癌细胞株，以需检测污染 物为受试物与改造后的细胞株(EGFP-HepG2)共培养，依据细胞绿色荧光强度来定 量检测和评价污染物的去甲基化表观遗传毒性的强弱（简称QDMP方法），对QDMP 方法的灵敏性和稳定性进行测试，并依据此方法，选取某环境高风险区的地表水、 地下水、土壤和底泥样品为代表性的环境样品，应用QDMP方法检测和评价其去甲 基化表观遗传毒性，并对环境样品污染物提取液的主要成分进行扫描检测分析。 结果：QDMP方法性能测试结果显示，该方法的评价灵敏度为0.00004μM；对浓度 范围介于0.00016，0.0008，0.004，0.02，0.1μM之间的5-Aza-CdR样品进行测试， 发现同一样品5个平行样品之间的荧光检测变异程度介于7.5~23.9%之间，显示出该 方法具有一定的稳定性。环境样品检测结果显示，在9个测试样（2个地表水、3个 地下水、2个土壤、2个底泥）中，有7个样品去甲基化能力较强，占总个测试样品 的78%，其去甲基化表观遗传毒性介于0.065-0.257μM的5-AZA-CdR当量之间。一 个底泥样品提取液毒性最高，毒性当量为0.257μM；重金属检测发现其中的Cd的浓 度为1.62mg/Kg，超过土壤中的标准限值1.00mg/Kg；一个地下水样品的毒性较高， 毒性当量为0.142 μM；重金属检测发现其中的Mn的浓度为4868.87ug/L，超过土壤 中的标准限值300ug/L。四个土壤或底泥样品中，三个样品的去甲基化能力较强， 重金属检测发现四个样品的重金属均超标，环境样品表观遗传毒性检测结果与环 境分析结果具有基本一致的趋势。 结论：QDMP方法具有良好的灵敏性和稳定性；部分环境样品的去甲基化表观遗传 毒性较强，对于环境样品污染物表观遗传毒性效应应该足够重视；环境样品去甲 基化表观遗传毒性可能与当地的重金属污染有关。 关键词：环境样品；pEGFP-C3；去甲基化；表观遗传 A Study on Demethylation Epigenetic Toxicity of Environmental Samples Pollutants from Environmental High Risk Area Abstract Objective：To test the effectiveness of QDMP method on evaluat