环孢素A对L6细胞肌原纤维蛋白分解信号通路的影响-临床医学;运动医学专业论文.docxVIP

I I 中英文缩写对照表 缩写 英文名称 中文名称 CaN Calcineurin 钙调神经磷酸酶 CsA Cyclosporin A 环孢素 A TEMED N,N,N,N-Tetramethylethylene-diamine 四甲基乙二胺 SDS Sodium dodecylsulfate 十二烷基磺酸钠 polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酞胺凝胶电泳 IGF-1 insulin-like growth factor-1 胰岛素样生长因子-1 NFATc nuclear factor of activated T cells 活化 T 细胞核因子 FoxO forkhead box O 人叉头框蛋白 O NC nitrocellulose 硝酸纤维素 AP ammonium persulfate 过硫酸铵 DMSO DEPC dimethyl sulfoxide diethypyrocarbonate 二甲基亚砜 焦碳酸二乙酯 II II 摘要 骨骼肌是一高度可塑性器官，对运动和饮食等因素可产生适应性改变。 研究表明运动训练可导致肌肉肥大、骨骼肌纤维类型的转化等。钙调神经磷 酸酶被认为是参与运动诱导的骨骼肌适应的重要信号通路。已有的一些研究 表明钙调神经磷酸酶不仅参与了运动诱导的肌纤维转换，而且还可能参与了 肌纤维肥大。另一方面，骨骼肌大小不仅与蛋白合成有关，而且也与蛋白分 解有关。FoxO1/MAFbx/MuRF1 是调节骨骼肌蛋白分解的重要信号通路。进一 步探讨钙调神经磷酸酶信号通路与 FoxO 通路之间的关系无疑对了解骨骼肌 的适应机制具有一定意义。 目的：本研究通过对大鼠骨骼肌 L6 细胞用环孢素 A 抑制其钙调神经磷 酸酶的活性，观察环孢素 A 对 FoxO1/MAFbx/MuRF1 信号通路的影响，探讨钙 调神经磷酸酶是否影响骨骼肌萎缩信号传导通路。 研究方法：L6 细胞分化 8 天后，随机分为四组：对照组，咖啡因组， 环孢素 A 组，咖啡因加环孢素 A 组。刺激 5 小时后，分别提取各组蛋白质和 核酸，进一步纯化后用于 Western blotting 检测胞浆胞核 FoxO1 蛋白含量 和荧光定量 PCR 实验检测 FoxO1、MAFbx、MuRF1 各基因表达。 研究结果：1.荧光定量 PCR 实验结果显示：与对照组比较，咖啡因组的 各基因表达均上调，其中 FoxO1 上调了 2.19 倍，MAFbx 上调了 3.23 倍，MuRF1 上调了 2.99 倍（P?0.05）；环孢素 A 组各基因表达与对照组均无明显差异； 环孢素 A 加咖啡因组的各基因表达均上调，其中 FoxO1 上调了 2.22 倍，MAFbx 上调了 3.14 倍，MuRF1 上调了 3.08 倍（P?0.05）。 2. Western blotting 实验结果显示：咖啡因组，环孢素 A 组，环孢素 A 加咖啡因各组胞浆和胞核 FoxO1 蛋白表达明显高于对照组；环孢素 A 组和 环孢素 A 加咖啡因组胞浆 FoxO1 蛋白表达还明显高于咖啡因组；环孢素 A 加 咖啡因组胞核 FoxO1 蛋白表达还明显高于咖啡因组和环孢素 A 组。 结论：1.咖啡因上调 FoxO1/MAFbx/MuRF1 各基因的表达并增加 FoxO1 蛋 白含量。 2.钙调神经磷酸酶不影响 FoxO1/MAFbx/MuRF1 的基因表达。 关键词：L6 细胞；FoxO；咖啡因；环孢素 A PAGE PAGE III ABSTRACT Skeletal muscle is a high degree of plasticity organs and can produce adaptive change in response to factors such as exercise and diet .Studies have shown that exercise training can lead to muscle hypertrophy and skeletal muscle fiber type conversion. Calcineurin is considered an important signaling pathway to participate in exercise-induced adaptive change of skeletal muscle .A number of studies have shown that calcineurin is not only involved in the exercise-induced muscle fiber conversi