顶空―固相微萃取―气相色谱―质谱联用技术对灌胃细辛后小鼠脑、肝和血液中7个挥发性.docVIP

顶空一固相微萃取一气相色谱一质谱联 用技术对灌胃细辛后小鼠脑、肝和血液 中7个挥发性主要成分的定量分析研宄 ［ ］采用顶空-固相微萃取-气相 色谱-质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS) 对灌胃给药细辛后吸收入小鼠体内的细 辛活性成分4-烯丙基苯甲醚、甲基丁香 酚、2, 3, 5-三甲氧基甲苯、3, 4, 5- 三甲氧基甲苯、细辛素、3, 5-二甲氧基 甲苯和黄樟醚进行了定量研究。采用 VF-WAXms 毛细管柱(0.25mmX30m， 0.25 U m)和 SPME 萃取头 PDMS/DVB(65 um)，建立了 7个成分的标准曲线，验 证了该方法稳定性（RSD-l，0.25mg?g-l; 甲基丁香酚 1.1，0.39 u g?g-l,0.69mg?g-l 2,3,5-三甲氧基甲苯 0.45，0.13 U g?g-l， 0.54mg?g-l; 3, 4, 5-三甲氧基甲苯 0.51， 0.15ug?g-l, 0.45mg?g-l；细辛素 0.48, 0.039 ug?g-l, 0.69mg?g-l； 3, 5-二甲氧 基甲苯 2.2，1.2ug?g-l，1.5mg?g-l;黄 樟醚 1.3, 0.67ug?g-l, l.lmg?g-lo 结果 表明HS-SPME-GC-MS分析方法适合于中 药中挥发性成分在体内的分析测定，样 品用量少，快速简便；含量测定数据为 进一步认识细辛药材有效物质和毒性物 质提供了科学资料。 ［关键词］细辛；挥发性成分；顶空- 固相微萃取-气相色谱质谱联用技术；定 量分析；生物样品检测；肝组织；脑组 织；血液 细辛为常用中药，用于风寒感冒、 头痛、牙痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻渊、 风湿痹痛、痰饮喘咳。但在细辛的临床 用量上自古以来就有争论：一方面认为 细辛散剂过量会导致中毒，“细辛若单味 用末不可过半钱匕（约lg），多即气闭塞 不通者死，虽死无伤”；而另一方面细辛 在《神农本草经》中被列为上品，且《名 医别录》亦曰：细辛无毒。目前对细辛 活性和毒性成分的体内研究较少，Ma等 使用LC-MS/MS对给药细辛后大鼠血浆 中的2个非挥发性成分芝麻脂素、细辛 脂素进行了动态的研究，但未研究体内 细辛挥发性成分；本课题组前期使用 HS-SPME-GC-MS 和 HPLC-APC卜IT-TOF-MSn对细辛鼻腔给药 后进入家兔血液和脑脊液的挥发性和非 挥发性成分进行了定性的检测，但未进 行定量分析研究。而细辛挥发性成分既 报道有活性，又被认为是主要的毒性部 分。因此有必要对细辛的挥发性成分在 给药后体内的吸收成分的含量进行研究， 通过对细辛给药后主要挥发性成分的定 量分析，阐明细辛在体内发挥作用的物 质基础。 HS-SPME-GC-MS是一种灵敏度高、 样品前处理简便的分析挥发性成分的方 法，能够对挥发性物质进行精确定性、 定量，现已被应用于环境、食品分析、 司法鉴定、植物、中药分析等各领域； 根据顶空固相微萃取的原理，涂层中分 析物的萃取量IV与其样品中初始浓度co 的关系为：对极易挥发的分析物N=[l-e -at) ]c0；对挥发性较低的分析物N: btcO （b是与分析物蒸发速率常数及其在 样品底层与顶空气相分配系数都相关的 一个常数）。由此可知，在涂层类型、萃 取时间、萃取温度等操作条件固定的前 提下，无论是否达到萃取平衡，分析物 在萃取涂层中的萃取量都与其初始浓度 成正比，因此，本研究选择 HS-SPME-GC-MS定量分析体内的细辛主 文献报道甲基丁香酚、黄樟醚、3, 5-二甲氧基甲苯为细辛中挥发油的主要 成分，甲基丁香酚具有降血压、镇咳、 镇痛等作用，3, 5-二甲氧基甲苯具有镇 静的活性，3, 4, 5-三甲氧基甲苯具有 抗炎的功效，4-烯端丙基苯甲醚有抗氧 化、抗菌和抗炎的活性，黄樟醚则有呼 吸中枢抑制作用。本课题组前期研究团 结果显不，3，4，5-二二甲氧基甲苯、2， 3, 5-三甲氧基甲苯、3, 5-二甲氧基甲苯 是细辛中可吸收入血发挥镇痛作用的有 效成分。因此，为了更好地对细辛在体 内发挥药效、产生毒性的物质基础进行 研宄，本文建立了给药细辛后7种挥发 性成分在小鼠体内的含量测定方法，即 选择使用HS-SPME-GC-MS分析细辛灌胃 给药后小鼠血液、肝和脑中细辛成分4 端丙基苯甲醚、甲基丁香酚、2, 3, 5- 三甲氧基甲苯、3, 4, 5-三甲氧基甲苯、 细辛素、3, 5-二甲氧基甲苯和黄樟醚的 含量。 1材料 Shimadzu QP-2010 Ultra GC-MS 联用 仪，配备有AOC-5000自动进样器； VF-WAXms 毛细管柱（0.25mmX30m， 0.25 um）； PDMS/DVBSPME 萃取头（65 u m，美国 Supelco 公司，型号 57293--U）;