聚乳酸组织工程材料的细胞瘤相容性表面设计分析.docx

聚乳酸组织工程材料的细胞相容性表面设计研究 摘要 本论文针对目前聚乳酸组织工程材料存在的细胞相容性问题，对聚乳酸材料进行 了三种不同类型的促细胞相容性表面设计与研究，并对促细胞相容性表面修饰的聚乳 酸组织工程材料进行了软骨细胞和成骨细胞相容性测试。 两亲共聚物一氮基酸(RGD)杂化体原位自修饰构建聚乳酸细胞相容性表面的研究 一本论文首先设计并合成了一类含疏水聚乳酸(PLA)链段和亲水聚氧乙烯(PEO) 链段的两亲嵌段共聚物材料(PLA—PEO)，利用PEO链端的活性官能团羟基固定了 促细胞粘附的氨基酸及整合素配体多肽片段RGD。采用简单的溶液共混一成膜法，获 得了两亲共聚物表面自修饰的聚乳酸(PLA)组织工程材料。利用衰减全反射傅立叶 转换红外光谱(ATR．FTIR)、X．射线光电子能谱(XPS)分析以及接触角测定对改 性聚乳酸材料表面进行了表征。基于两亲共聚物在疏水高聚物材料内的自迁移和表面 富集行为，在聚乳酸材料上构建了以PEO桥联氨基酸或整合素配体多肽片段的类细 胞外基质表面。 在两亲共聚物．氨基酸(RGD)修饰的聚乳酸平面材料上的软骨细胞和成骨细胞 相容性测试结果表明：以碱性氨基酸及RGD为活性端基的两亲共聚物改性聚乳酸体 系，对细胞的粘附、生长及活性均有明显的促进作用。在该体系中，PEO的链长对细 胞的粘附与生长也有重要的影响作用。本论文的实验结果在PEO链长为2000分子量 时对软骨细胞的粘附与生长有最佳的作用。 采用基于水相体系的盐溶．沥出(salt．1eaching)技术和两亲共聚物表面自富集行 为有机结合，本文成功地获得了一种在三维支架成型过程中原位自修饰获得PEO桥 联氨基酸(RGD)表面的制备方法。该改性技术可显著提高聚乳酸支架的亲水性，尤 其可显著提高聚乳酸支架的吸水能力，非常有利于三维支架的细胞培养。激光共聚焦 显微镜(CLSM)对荧光标记两亲共聚物修饰聚乳酸支架的研究表明，两亲共聚物材 料确实在聚乳酸支架内表面形成了很大程度的富集。这种亲水表面不仅有利于细胞悬 液和培养介质的进入，并可以通过PEO桥联的氨基酸(RGD)为细胞在三维多孔支 架内的生长提供类细胞外基质环境： 根据以上结果，本文对碱性氨基酸为PEO链端基的两亲共聚物一氨基酸类细胞外 基质修饰的聚乳酸三维支架进行了细胞相容性的测试。软骨细胞的蛋白质含量和细胞 活性测试结果表明，软骨细胞在原位自修饰的聚乳酸三维支架内有较强的分裂增殖能 力和较高的细胞活性。扫描电镜和激光共聚焦显微镜的测试结果显示了软骨细胞在原  浙江大学博士学位论文f20031 位自修饰的聚乳酸三维支架内部良好的粘附与生长情况。成骨细胞在原位自修饰聚乳 酸三维支架内的蛋白质含量、DNA含量和细胞活性测试结果表明，成骨细胞在原位 自修饰的聚乳酸三维支架内有较高的细胞活性和较强的分裂增殖能力。扫描电镜的分 析结果显示了软骨细胞在原位自修饰的聚乳酸三维支架内部良好的粘附与生长情况。 该结果显示两亲共聚物一氨基酸杂化体原位自修饰聚乳酸组织工程支架材料具有良好 的细胞亲和性。但本文成骨细胞碱性磷酸酶活性的测试结果表明两亲共聚物一氨基酸类 细胞外基质修饰的聚乳酸材料对成骨细胞的分化没有明显的促进作用。 生物大分子截留法构建聚乳酸细胞相容性表面的研究一本文通过将氨基酸(L． 天冬氨酸、L一精氨酸、L一赖氨酸和L一苯丙氨酸)和天然聚多糖(海藻酸钠和壳聚糖) 结合，设计了模拟细胞外基质组分的天然聚多糖一氨基酸衍生物。核磁氢谱(’HNMR)、 傅立叶转换红外光谱(FTIR)和紫外一茚三酮(ninhydrin．UV)的分析结果证实产物具 有预期的结构。论文突破传统表面截留技术仅针对合成聚合物的局限，将其拓展到天 然生物大分子一聚多糖及其氨基酸衍生物在聚乳酸组织工程材料的表面修饰中，构建 了新型的细胞相容性表面。结合聚多糖的荧光标记技术，本文首次利用激光共聚焦显 微镜研究并直接验证了表面截留区域的存在。利用该技术，测得生物大分子表面截留 层的厚度为10—209m。对截留表面进行的衰减全反射傅立叶转换红外光谱 (ATR—FTIR)、X．射线光电子能谱(XPS)分析、接触角测定以及原子力显微镜观 察也显示：通过表面截留技术，可以在聚乳酸材料上获得稳定的亲水化聚多糖一氨基酸 截留表面。 软骨细胞的细胞粘附率、增殖率和细胞活性以及细胞形态的实验结果表明，聚多 糖及其氨基酸衍生物改性的聚乳酸表面能明显促进软骨细胞的粘附与生长，并具有较 高的细胞活性。该结果表明聚多糖及其氨基酸衍生物改性聚乳酸材料表面具有良好的 细胞相容性。 生物大分子静电自组装构建聚乳酸细胞相容性表面的研究一本文通过大分子胺 解的方法，将聚乙烯亚胺(PEI)通过化学键合固定在聚乳酸组织工程材料上，在聚 乳酸材料表面构建了稳定的正电荷表面层