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实验室检测技术培训 2012-8-31;目 录; 一、细菌对生产的危害及药敏试验;1.1 水质管理对家禽生产性能的影响;水中微生物能够影响肠道内的微生物菌群 肠道微生物菌群的作用： . 维护肠道健康 . 抵制疾病 . 生产性能和效益 . 利润率 . 食品安全 影响水质的重要因素： 细菌和其他微生物 矿物质 pH值 水线卫生状况 水质监测 目前我们所检测的细菌总数的含量标准cfu≤100/ml；大肠≤1/ml; 保证最优水质的步骤： 第一步：检测 测定水中的细菌数量（总细菌数和大肠菌）；测定水的pH值；测定水的硬度；测定水中矿物质含量 我们每个车间都应做的工作｛ 有效控制微生物的含量 1、氯化处理 2、使用碘液消毒 3、臭氧消毒 4、过氧化氢消毒 5、酸化处理 ;1.2大肠菌群及沙门对家禽的影响;沙门氏菌对种鸡场的危害;造成经济和声誉的双重损失;检测方法局限;种鸡场沙门氏菌常见控制方法 ;1.3 药敏试验; 二、 血清学检测技术在生产中的应用; 定义 血凝（HA）：某些病素或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝，也称直接血凝反应。 血凝抑制（HI）：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞的表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触，这时红细胞的凝集现象被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑制反应。 抗原：凡能刺激机体产生抗体，并能与抗体结合而发生反应的物质成为抗原。 ; 适用范围： 适用于对鸡新城疫(ND)，禽流感(AI:H9、H5(H5-4、H5-5)亚型)，鸡减蛋综合症(EDS)抗体滴度的检测。 ; 判定标准： 1.ND：育雏育成鸡在6以上，产蛋鸡在8以上 2.H5：育雏育成鸡在5以上，产蛋鸡在7以上 3.H9：育雏育成鸡在6以上，产蛋鸡在8以上 注：在实际生产中，则以实际免疫程序进行分析抗体滴度值的高低。 免疫后抗体规律一般活疫苗免后7-10天产生抗体，2-3周抗体到达峰值，可以维持1-2个月灭活疫苗免后10-15天产生抗体，3-4周抗体到达峰值，可以维持3-4个月对H5抗体要求7—11 log2，低于6log2时及时免疫H9抗体在8--11 log2，当最低抗体为7log2时及时免疫H9单苗ND抗体在8--12 log2产蛋鸡最低值7log2补苗;2.2 ELISA抗体检测操作规程; 间接ELISA：一般用于抗体的检测，将已知抗原包被于固相载体上，加入含有特异性抗体的被检血清，再经洗涤后加入酶标二抗，洗涤后加底物，底物分解，出现变色，用酶标仪测出它的吸光值 1 原理 1.1 使抗原或抗体结合到固相载体表面，并保持其免疫活性。 1.2 使抗原或抗体与酶结合成酶标抗原或抗体，并保持抗原或抗体的免疫活性和酶的活性。 1.3 酶标的抗原或抗体与相应的抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶催化底物形成水解、氧化或还原反应，形成有色物质，其颜色深浅与标本中抗原或抗体的量直接相关。 特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位 ; 注意事项 ELISA试剂盒购回后及时冷藏（3∽8摄氏度）于冰箱中。 实验开始前从冰箱中拿出检测板和相应的试剂于室温（22∽25摄氏度）下进行回温2小时以上，一定要完全回温后才能开始进行实验操作。 要认真处理所有的病毒生物材料，以防病毒的传播。不要使TMB溶液暴露在强光或任何氧化剂条件下。在整个操作过程中，滴加和洗涤要仔细。 实验时要根据试剂盒的操作说明书来完成。;三、活苗病毒含量的测定（EID50）及无菌检验;四、灭活苗稳定性和粘度实验;五、饲料检测理化技术----检测项目及原理;2.粗灰分 2.1原理：试样在550℃灼烧后所得残渣,用质量百分率来表示.残渣中主要是氧化物,盐类等矿物质,也包括混入饲料中的沙石,土等,故称为粗灰分. 2.2步骤：在已恒重的坩埚中称取2克试样（灰份质量0.05克以上）准确至0.0002克，在电炉上小心炭化，在炭化过程中，应将试样在较低温度状态下加热灼烧至无烟，尔后升温灼烧至样品无炭粒，再放入高温炉，于550℃±20℃下灼烧3小时，取出，在空气中冷却约1分钟，放入干燥器中冷却至30分钟，称取质量，再同样灼烧1小时，冷却，称重，直至两次质量之差小于0.001克为恒重。 2.3要点：在电炉上开始小火烧至无烟，再加大火碳化至无碳粒，再转移到高温炉中灼烧3h，取出后冷却30min,称重，再复烧30min，称重。 ;3.粗蛋白 3.1原理（凯氏定氮法）：在催化剂的作用下，用硫酸破坏有机物，转化成硫酸铵；硫酸铵在强碱的作用下进行蒸馏逸出氨，用硼酸吸收，最后用盐酸滴定，测出氮含量 3.2步骤：称取0.3g(含氮量5-8