重组大肠杆菌发酵生产β2葡聚糖酶工艺条件研究-厦门大学学报自然.PDF

第 48 卷 　第 1 期 ( ) Vol . 48 　No . 1 厦门大学学报 自然科学版 　2009 年 1 月 J our nal of Xiamen U niver sit y (N at ural Science) J an . 2009 　 β 重组大肠杆菌发酵生产 葡聚糖酶工艺条件研究 1 1 1 1 1 ,2 刘 　征 ,程志敬 ,何 　宁 ,敬科举 ,卢英华 ( 1. 厦门大学化学化工学院 ,2 . 化学生物学福建省重点实验室 ,福建 厦门 36 1005) β 摘要 : 通过对重组大肠杆菌J M 109pL F3 摇瓶发酵生产 1 ,31 ,4葡聚糖酶工艺条件的研究 ,得出最佳培养条件为 :温 度 39 ℃,摇床转速 150 r/ min ,培养基装量 20 mL/ 250 mL ,培养基初始p H 6 . 7 ,种子培养时间 16 h ,接种量 1 %. 在最佳培 养条件下 ,发酵 30 h 酶活力达到最大值 481. 4 1 U/ mL . 最优条件下摇瓶恒速补加氮源对酶活的提高贡献较大 ,且适当提 高流加量对促进产酶效果更明显 ,酶活力可达 628 . 30 U/ mL ,为初始时的2 . 1 倍. β 关键词 : 葡聚糖酶 ;大肠杆菌 ;培养条件 ;流加培养 Q 939 . 97 　　　 A 　　　　　 (2009) 0 1008906 中图分类号 : 文献标识码 : 文章编号 : β 　　1 ,31 ,4葡聚糖属植物细胞壁中的结构性非淀 存在菌体生长慢 ,酶产量和比活低 ,耐热性较差 ,不适 ( ) ( ) β [ 8 ] 粉多糖 ,是以混合 1 3 和 1 4 糖苷键连接形成 合工业化生产的要求 . 大多数饲用酶制剂生产厂家 的D 型葡萄糖聚合物 ,它主要存在于麦类和糠麸中 , β 所用的 葡聚糖酶主要依靠进口,严重地制约了制糖 、 [ 1] β 在大麦整粒和胚乳中的含量高达 4 . 0 %～8 . 0 % . 啤酒和饲料工业的发展. 因此 ,利用克隆重组技术构建 1 ,31 ,4葡聚糖主要被 3 种葡聚糖 内切酶分解 ,它们 β 高通量表达 葡聚糖酶的菌株 ,并进行产酶条件的研 β ( ) β ( 是 1 ,4葡聚糖酶 EC 3 . 2 . 1. 4 、1 ,3葡聚糖酶 EC 究 ,具有重要的现实意义. 最近浙江大学饲料科学研究 ) β ( ) 3 . 2 . 1. 39 和 1 ,31 ,4葡聚糖酶 EC 3 . 2 . 1. 73 . 另 所教育部动物分子营养重点实验室在大肠杆菌中克隆 外 ,葡聚糖外切酶也起一定的作用. 其中作用最强的是 β β