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生活饮用水微生物指标检验 检测依据：GB 5750-2006 《生活饮用水卫生检验规范》 实验目的与要求 掌握水样采集规则及注意事项。 熟悉常用水卫生细菌学指标。 熟悉菌落总数、大肠菌群、耐热大肠菌群的测定方法及检测意义。 学会对所检测的水样作综合分析。 生活饮用水中微生物指标 水微生物检测的意义 水体的微生物污染问题日趋严重。 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长。 水体中微生物污染的来源：土壤，以及人类、动物的排泄物污染。 水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染）可导致某些肠道传染病传播。 水微生物检测可用于评价水质情况，预报水质的污染趋势，以保证水质的卫生安全。 在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对水体中各种可能存在的致病微生物一一进行检测。 一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，通过对指示菌的检测，来了解水体是否受到过的微生物污染，是否有肠道病原微生物存在的可能。 水微生物的检测指标 菌落总数(aerobic bacterial count) 是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经48h培养后，所生长的细菌菌落的总数。 检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。 水质微生物的检测指标 总大肠菌群(coliform bacteria) 是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 检测意义：作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。 实验内容 水样采集； 菌落总数的测定； 总大肠菌群的测定; 耐热大肠菌群的测定。 微生物指标常规检验流程 一、水样采集 水样采集 采样原则 所采集的样品具有代表性。 采样容器：选择无菌硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。 不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待测组分；不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间，样品各组分的浓度不发生改变。 微生物样品必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证在运送、贮存过程中不受污染。 水样采集 自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min（经常用水的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌玻璃瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。 水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，一般距水面下10～15cm采样。采样后，将瓶塞盖好，再从水中取出。 水样采集 注意事项 严格无菌操作。 做好标记：采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等内容。 从速送检。水样从采集到检验不应超过2h，在4℃下保存不应超过24h。 实验前准备 1、灭菌吸管 10mL、1mL刻度吸管分别包好，160℃干烤2h灭菌 2、9mL灭菌生理盐水 3、相应的灭菌培养基 4、检验前 ，无菌室及超净台用紫外线灯照射30min 菌落总数 定义： 是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含细菌菌落的总数 。 培养基： 营养琼脂 设备： 放大镜/菌落计数器 菌落总数平板计数法 菌落总数平板计数法 [方法] 水样摇匀20次左右，使细菌分散。 倾注培养：无菌吸取1ml水样分别置于2个空平皿，另一个作空白对照。再倾注15ml琼脂（约45℃）于平皿中旋转，混匀待琼脂凝固后倒置37℃48h。 菌落计数：用肉眼或放大镜检查，计数平皿内菌落数目。 菌落总数平板计数法 [结果分析与报告] 计算平均菌落数： 报告方式：菌落总数(cfu/ml)。 cfu：colony forming units 当检样的菌落数为l~100时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字报告。 国家标准（GB5749-2006）规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。 （二）水源水 [器材与试剂] 无菌1ml吸管6支/组，无菌10ml吸管1支/组。 无菌平皿9个/组，营养琼脂。 90ml灭菌盐水1瓶（内置适量玻璃珠），9ml灭菌盐水管3支。 [方法] 稀释水样： 无菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,混匀成1:10水样。 取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成1:100水样。同法稀释成1:1000, 1:10000水样。 [方法] 倾注培养： 用1ml无菌吸管吸取2~3个适当浓度的稀释液1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾注培养(方法同饮用水)。 菌落计数：方法同饮用水。 菌落总数测定 菌落总数平板计数法 [结果分析与报告] 计算不同稀释度的平均菌落数： 稀释度的选择和菌落总数报告方式：