CRISPRCas9技术在获取拟南芥双突变体材料中的应用.PDFVIP

中国农学通报 2018,34(8):27-36 Chinese Agricultural Science Bulletin CRISPR/Cas9技术在获取拟南芥双突变体材料中的应用 1 1 2 1 吕晶森 ，谭成方 ，刘春林 ，阮 颖 1 2 （湖南农业大学生物科学技术学院，长沙410128 ；湖南农业大学农学院，长沙410128 ） 摘 要：为了研究含双MATH 结构域基因sb3 与sb6 的功能，需要创制这2 个紧密连锁基因的双突变体。 利用CRISPR/Cas9 基因编辑技术对拟南芥Col-0 中的sb3、sb6 基因进行特异性定点双敲除。通过PCR 和Singer 测序验证，共获得10株T 代转基因植株，其中5 株在目标片段上没有发生编辑；另5 株在sb3 基 0 因上的目标序列都发生了编辑，在sb6 基因的目标序列上只有2 株发生了编辑。至此成功获得了sb3 与 sb6 基因双敲除的突变体，且获得该突变的类型为核苷酸缺失突变体。这个双突变体的获得为进一步 研究双MATH 结构域基因在拟南芥中的功能奠定了良好的基础。 关键词：拟南芥；双MATH 结构域基因；紧密连锁；CRISPR/Cas9 ；定点双敲除 中图分类号：Q943.2 文献标志码：A 论文编号：cas ApplicationofCRISPR/Cas9TechnologyinObtainingDoubleMutantMaterialsof Arabidopsisthaliana 1 1 2 1 LvJingsen,TanChengfang,LiuChunlin,RuanYing 1 (CollegeofBioscienceandBiotechnology,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128; 2AgriculturalCollege,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128) Abstract:Tostudythegenefunctionof sb3 and sb6 containingtwoMATHdomains,weneedtoobtainthe doublemutantsofthesetwocloselylinkedgenes.CRISPR/Cas9 geneeditingtechnologywasusedtocreate specialdoubleknockoutmutantsofsb3 andsb6genesinArabidopsisthaliana Col-0., 10T transgenicplants0 wereobtainedbyPCRandSingerSequencing.Amongthem, 5 transgenicplantshadnoeditingintarget sequence.Intheotherfivetransgenicplants,thetargetsequenceof sb3 gene was edited,butthetarget sequenceofsb6 genewaseditedonlyin 2transgenicplants.Sofa