哺乳动物抑制型转录因子及启动子对的全新设计与构建.PDFVIP

1886 生 物 工 程 学 报 杨子杰 等/ 哺乳动物抑制型转录因子及启动子对的全新设计与构建 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Dec. 25, 2018, 34(12): 1886−1894 DOI: 10.13345/j.cjb.180290 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved ·iGEM 专栏· 杨子杰，潘祎杰，蔡毅鸣，傅彤，冯骜，刘燕，王一恒，熊心旋，蔡亮 复旦大学 生命科学学院，上海 200438 杨子杰, 潘祎杰, 蔡毅鸣, 等. 哺乳动物抑制型转录因子及启动子对的全新设计与构建. 生物工程学报, 2018, 34(12): 1886–1894. Yang ZJ, Pan YJ, Cai YM, et al. De novo construction of mammalian synthetic inhibitory transcription factor and promoter pairs. Chin J Biotech, 2018, 34(12): 1886–1894. 摘 要: 转录因子及启动子是基因回路的基础。相较于原核启动子，真核启动子作用机制复杂，增加了全新设计 与改造的难度。目前有限数量的真核转录因子及启动子成为在哺乳动物细胞中设计并实现复杂基因回路以满足各 类临床或工业应用需求的瓶颈。文中介绍了基于能够结合特定 DNA 序列的 DNA 结合结构域，通过柔性连接肽 连接到转录抑制模块KRAB ，构建抑制型转录因子以及通过在SV40 启动子下游插入结合序列构建对应启动子的 方法。而后，在哺乳动物细胞系中通过流式细胞术对其抑制转录的强度、不同转录因子及启动子对之间的正交性 进行了测定。文中提供了一套标准化的、可调节的转录因子及启动子的全新设计与构建方案。基于该方案所构建 的5 对抑制型转录因子及启动子对能够在哺乳动物细胞中起到不同程度的抑制效果且相互正交。文中构建的哺乳 动物转录因子及启动子对扩充了哺乳动物生物元件库，为构建复杂真核基因回路打下了基础；运用该设计方法能 够根据需求构建更多正交的人工转录因子及启动子对。 : 真核转录调控，人工转录因子，人工启动子，合成生物学，生物元件 De novo construction of mammalian synthetic inhibitory transcription factor and promoter pairs Zijie Yang, Yijie Pan, Yiming Cai, Tong Fu, Ao Feng, Yan Liu, Yiheng Wang, Xinxuan Xiong, and Liang Cai School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200438, China Abstract: Transcriptional regulation is crucial for regulated gene expression. Due to the complexity, it has been difficult to engineer eukaryotic transcription factor (TF) and promoter pairs. The