人关节软骨来源CD105CD166间充质干细胞的分选及其多向分化特性的鉴定.docVIP

PAGE PAGE 5 人关节软骨来源CD105+/CD166+间充质干细胞的分选及其多向分化特性的鉴定 常红星，杨 柳，李 忠，陈光兴，刘 军，文亚名，戴 刚 （第三军医大学西南医院关节外科中心，重庆400038） 摘 要：目的 建立免疫磁珠技术高效分选人关节软骨CD166+/CD105+间充质干细胞（MSCs）的方法，并鉴定其多向分化特性。方法 酶消化法获取5例手术切除的膝关节软骨组织细胞，并行原代和传代培养；流式细胞仪检测其中CD166+/CD105+细胞百分比。比较免疫磁珠连续法与间断法分选P4培养细胞中CD166+/CD105+细胞的所需时间、分选细胞活度及其百分比和收获率。对连续法分选CD166+/CD105+细胞进行成骨、成软骨、成脂肪诱导，Gomori钙钴法碱性磷酸酶（ALP）、Ⅱ型胶原免疫组化、油红O染色检测其分化特性。结果 人关节软骨组织分离细胞和原代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比较低[（1.13 ? 0.68）%、（5.16 ? 3.59）%]，传代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比随传代次数增加而明显增高[P2、P4、P6培养细胞中CD166+/CD105+细胞百分比分别为(12.68 ? 2.59)%、（17.81 ? 3.80）%、（19.36 ? 3.93）%]（P ＜ 0.05），传代培养至P4代后，其CD105+/CD166+细胞百分比相近（P ＞ 0.05）。连续法分选CD166+/CD105+细胞成骨诱导后ALP染色阳性，成软骨诱导前II型胶原弱阳性、诱导后II型胶原阳性，成脂肪诱导后细胞内可见脂肪滴、油红O染色阳性。结论 人关节软骨P4、P6培养细胞中的MSCs比例较高。免疫磁珠连续法能够高效分选人关节软骨MSCs，所分选的MSCs具有成骨、成软骨及成脂肪分化功能。 关键词：人关节软骨；CD166+/CD105+；间充质干细胞；免疫磁珠；细胞分选 中图法分类号： 文献标识码：A Immunomagnetic separation and differentiation of mesenchymal stem cells in human articular cartilage CHANG Hong-xing, YANG Liu, LI Zhong, LIU Jun, CHEN Guang-xing, WEN Ya-ming, DAI Gang (Centre for Joint Surgery, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038,China) Abstract：Objective To establish a simple and feasible method of immunomagnetic separation of CD166+/CD105+ mesenchymal stemr cells（MSCs）from human articular cartilage. Methods The CD166+/CD105+ MSCs in chondrocytes isolated and cultured from human knee articular cartilage with primary osteoarthritic (OA) were analyzed by flow cytometry just after digested, passage0, passage2, passage4 and passage6. The two techniques of immunomagnetic separation of CD166+/CD105+ MSCs from the passage4 chondrocytes cultured were evaluate by separation time,cell activity, CD166+/CD105+ MSC ratio and its cell harvesting ratio.The two techniques included the Alsalameh two stage method and the our continuous process. The potential of CD105+/CD166+ cells to differentiate to adipogenic, osteogenic, and chondrogenic lineages was analyzed after immun