乳腺干细胞研究进展.docVIP

PAGE PAGE 2 乳腺干细胞研究进展 肖福英1, JING LIU 2，TAOSHENG HUANG 2,3,4* 1桂林医学院 生物技术学院；2Department of Human Genetics/Pediatrics, 3Department of Pathology and 3Department of Developmental and Cell Biology, University of California, Irvine, California, USA. * 通信作者 摘要 乳腺干细胞是静止的但能够自我更新和分化成有功能的乳腺的一种细胞。许多不同的技术已用于鉴别乳腺干细胞。然而直到最近，随着细胞表面标志Lin-CD24 + CD29high的发展，乳腺干细胞才没这么难以琢磨。在脂肪垫里带有Lin-CD24 + CD29high的单细胞能够发育成为一个功能齐全的乳腺，为乳腺干细胞的标记提供了强有力的证据。乳腺球培养促进了对乳腺干细胞自我更新和生存的信号通路的理解。阐明乳腺干细胞和乳腺癌干细胞对发展更有效地治疗乳腺癌的方法不可或缺。 引言 乳腺发育是一个复杂的过程。在小鼠早期乳腺的发育中，简单的乳腺导管树已经形成[1] 。出生后直至青春期，乳腺生长一直保持静止 [2] 。在青春期，从导管树的顶端长出终末芽胚（terminal end buds,TEBs）。TEBs是由两种细胞组成的，帽细胞形成单一的外层，体细胞构成多重的内层。目前认为乳腺干细胞（mammary stem cells, MSCs）存在于TEBs的帽细胞中，TEBs 中细胞增殖导致乳腺脂肪垫中的导管延长，在青春期末，TEBs接触到脂肪垫的边缘而消失[2，3]。一个复杂的网络调控着乳腺的发育。在细胞水平，乳腺由肌上皮细胞和管腔上皮细胞细胞构成，两者都起源于共同的乳腺干细胞，乳腺干细胞有以下三种功能：1).发育成成人的乳腺; 2).在怀孕、哺乳和恢复周期能扩增和乳腺再造；3).在组织受损时修复乳腺。 乳腺干细胞的分离 乳房组织中乳腺干细胞的存在最初是由限制性稀释移植实验证实的[4]，始祖细胞能产生一个完整的有功能性的乳腺。许多一流的实验[5] 又将这一观点进一步发展，例如，通过外科手术移植一块乳腺到脂肪垫能产生有功能的乳腺，并且不依赖于年龄和发育时期。一些技术如细胞表面标志SCA1、Hoechest 染色、rhodamine-123 荧光染色、BrdU标志和雌激素受体[6]等曾被用来识别和分离乳腺干细胞。然而，这些技术都已被证明不十分可靠，产生的数据过于牵强附会。 直到最近，新的细胞表面标记的发现极大地推动了乳腺干细胞的研究。许多数据显示Lin-CD24 + CD29high 细胞群中含有乳腺干细胞[6，7]。单个Lin-CD24 + CD29high细胞能产生有功能的乳腺[6]。分离乳腺干细胞时，首先将Lin+(CD31+,CD45+和TER 119+) 细胞移去，CD31是上皮细胞的标志，CD45和TER 119是造血细胞标志。因此，Lin+(CD31+,CD45+和TER 119+) 细胞被认为是分化成熟的细胞。 与之相反，CD29是皮肤干细胞标志[8]，而CD24是神经干细胞标志[9]。采用这些细胞表面标志，最终单个Lin-CD24+ CD29high细胞能产生有功能的乳腺，支持乳腺干细胞确实存在于这种细胞亚群。。 乳腺球培养 乳腺球类似于悬浮培养的神经干细胞形成的神经球，Wicha 等人为了分离未分化的乳腺干细胞而发展出了这一技术。在乳腺球培养系统中，机械分离的乳腺组织在锚定独立条件下悬浮培养[10]，起源于单个细胞的乳腺球能够分化成乳腺的多种不同的细胞系。在基质胶上，从乳腺球分离出的单个细胞能形成类似乳腺的功能性导管和小叶结构，加入泌乳刺激素能使细胞分泌β-casein进入管腔。其他研究也证实由乳腺球分离出的细胞能在多次传代后保持未分化状态。乳腺球培养系统已广泛应用于乳腺干细胞自我更新和分化的信号通路研究。 乳腺干细胞增殖和生存的信号通路（图1） Wnt信号通路在乳腺癌和乳腺干细胞增殖中起着重要的作用 在Wnt信号通路中, Wnt蛋白通过与其受体复合物结合产生信号，受体复合物由Frizzle和LDL受体家族组成。细胞质中，β-catenin在Wnt信号中起了重要角色，其稳定性受复合体降解的调节。在缺乏Wnt信号时，包括APC 和Axin支架蛋白在内的几种蛋白与β-catenin形成复合体, 导致其被蛋白酶降解。当Wnt蛋白与其受体结合, Wnt信号通路激活，β-catenin在细胞质中累积并且进入细胞核与Tcf/Lef家族转录因子形成复合体，进而调节靶基因的表达。在乳腺的发育中， Wnt是必需的。[11]，Lef1-/-小鼠