微生物学实验重庆医科大学基础医学实验教学中心.pptxVIP

教材高等医学院校基础医学实验教学系列教材 ?病原生物学实验? 科学出版社，2008年6月 主编 杨致邦 叶彬临床医学本科实验内容及安排实验课内容学时数显微镜录像1细菌形态观察 4需要　2细菌的生长现象与消毒灭菌 4　有3致病性球菌4需要有4肠道杆菌4　有5白喉杆菌、厌氧菌4需要　6四体、真菌、病毒 4需要有非临床医学本科实验内容及安排实验课内容学时数显微镜录像1细菌形态结构的观察 4需要　2细菌的生长现象与消毒灭菌 4　有3四体、真菌、病毒 4需要有 实验一细菌形态结构的观察 Observe on Morphology and Structure of Bacteria【目的要求】1.熟悉实验室生物安全规则,掌握无菌操作技术；2.掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法；显微镜(油镜)下细菌形态的观察; 革兰染色结果判断；3.掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的形态特点。【实验内容】1.实验室生物安全规则；2.细菌标本革兰染色观察（Gram’s Stain)(每人做）；3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）； 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。【实验材料】 (1)菌种: 葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。 (2)试剂:革兰染色液。 (3)其他:生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯等。【实验方法】1．细菌涂片的制作步骤：涂片 干燥 固定 注意点：1）无菌操作2）加生理盐水（固体培养物）载玻片生理盐水 生理盐水 生理盐水 + + +葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌2.革兰染色1)方法初染: 结晶紫和碳酸氢钠各1～3滴,3s-5s，水冲净,甩干。媒染: 碘液1～3滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。脱色: 95%乙醇数滴,5s-10s, 水冲净,甩干。复染: 稀释石炭酸复红液1～3滴,10s，水冲净,甩干。关键步骤：掌握脱色程度。3.观察标本片自然干燥或在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油,油镜下观察。【结果观察】指标:形态、染色性、排列。染色性判断：革兰阳性菌染成蓝紫色, 革兰阴性菌染成红色。葡萄球菌:革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列。Gram’s Stain,×1000大肠杆菌:革兰阴性杆菌,不规则分散排列。Gram’s Stain,×1000 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察注意点：观察时只能动显微镜的微调,不要动位置。要求：画图记录。1）破伤风杆菌的芽胞:芽胞染色×10002)变形杆菌的鞭毛:鞭毛染色×1000 3)肺炎链球菌的荚膜:荚膜染色×1000【实验注意点】1.生物安全、无菌操作,菌种管清理；2.显微镜(油镜)的使用——用后擦镜头；3.用过的载玻片放进有消毒水的玻缸。4.做好清洁卫生。【实验报告内容】1.细菌标本革兰染色观察（方法、结果画图、讨论）；2. 细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）观察（画图）。【实验报告示范】实验一细菌形态结构的观察【实验内容】1.实验室生物安全规则（每人掌握）；2.细菌标本革兰染色观察（Gram’s Stain)(每人做）；3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）； 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。【实验材料和方法】一、细菌标本革兰染色观察1．细菌涂片的制作菌种：葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物方法：涂片 干燥 固定 1）涂片：在酒精灯火焰旁用接种环无菌操作取生理盐水和葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物，涂抹、混匀于载玻片上，如下图：生理盐水 生理盐水 生理盐水 + + +葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌2）干燥将涂片在酒精灯火焰上方约20cm高处烤干。3）固定将载玻片以均匀的速度通过酒精灯火焰来回3次。2.革兰染色1)方法初染: 结晶紫和碳酸氢钠各1～3滴,3s-5s，水冲净,甩干。媒染: 碘液1～3滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。脱色: 95%乙醇数滴,5s-10s, 水冲净,甩干。复染: 稀释石炭酸复红液1～3滴,10s，水冲净,甩干。3.观察将标本片在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油,油镜下观察。4.结果见图1:葡萄球菌:革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列大肠杆菌:革兰阴性杆菌,不规则分散排列图1：细菌标本革兰染色观察结果Gram’s Stain,×10005.讨论 本实验结果表明,通过革兰染色在油镜下可清楚地观察到标本片上细菌的形态、染色性和排列状态。革兰染色可将细菌