DP433血液总RNA提取试剂盒操作-天根生化科技.PDFVIP

（DP433）血液总RNA提取试 剂盒操作指南 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. 新鲜血液样品（200 μl ） 2. 无水乙醇，β-巯基乙醇 3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ， 1ml）1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free） 4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴 台式低温离心机 实验准备-试剂盒准备1 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇， DNase I储存液的配制 加入量请参见瓶上标签。并在加入无水乙醇后 在瓶身做好标记。 将DNase I干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH O中，轻柔混匀，分装后-20贮存（可保存9个月）。 2 注意：从-20融化后的DNase I储存液保存于4 （可保存6周），不要再次冻存。 实验准备-试剂盒准备2 建议在通风橱内操作 操作前在RL中加入β-巯基乙醇 至终浓度为1%，如1 ml RL中加 入10 μl β-巯基乙醇。此裂解液 最好现用现配。配好的RL 4 可放置一个月，裂解液RL在储 存时可能会形成沉淀，如果有 沉淀出现，请加热溶解后使用。 Step 1 红细胞裂解液的稀释 如待处理的血液样品体积为200 μl，则取140 μl 10 ×红细胞 裂解液，用RNase-Free ddH2O稀释至1×红细胞裂解液。 如同时提取多个样品，建议混合统一配置DNase I 工作液。 如样品较多建议在配置时预留出一定的量，以免因移液器的 误差或枪头吸附造成总量不够的情况。 Step 2 向200 μl人类全血中加1 ml 1×红细胞裂解液 Step 3 在冰上孵育10-15 min，在孵育过程中涡旋振荡混匀2次。 注意：在孵育的过程中溶液将变成半透明状态，表明红细胞裂解。如果必要的话， 孵育时间可延长至20 min 。 Step 4 4 2,100 rpm (~400 ×g)离心10 min，将上清完全去除。 Step 5 向白细胞沉淀中加入1×红细胞裂解 用移液枪反复吹打重悬细胞 液（加入1×红细胞裂解液的体积是 第1步中全血用量的2倍） Step 6 4，2,100 rpm (~400 ×g)离心10 min，将上清完全去除。 Step 7 向白细胞沉淀中加入裂解液RL （使用前请加入β-巯基乙 醇），具体加量按照下表进行，涡旋或使用移液器混匀。 注：如果血液不是健康人的全血，需要根据血液中白细胞的 数量来确定所需裂解液RL的体积，此时细胞应完全裂解， 块状细胞沉淀消失。 裂解液RL(μl) 健康人类全血(ml) 白细胞数量 350 小于0.5 多至2 ×106 600 0.5-1.5 2 ×106至1×107 S