第十一作章分子荧光与分子磷光光谱法.pptVIP

Fluoscence荧光分光光度计(Cary Eclipse) 澳大利亚 * 第十一章 分子荧光与分子磷光光谱法 分子发光分析Molecular Luminescence Analysis 分子发光分析包括荧光、磷光、化学发光、生物发光和散射光谱等。 一、基本原理 分子发光：处于基态的分子吸收能量（电、热、化学和光能等）被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回至基态并发射出光子，此种现象称为发光。发光分析包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。 物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光 单重态和三重态： 分子中的电子运动包括电子轨道的运动和电子的自旋运动。分子中电子的自旋状态可用多重态 2S+1 描述（电子激发态的多重度用M＝2S+1表示），S 为总自旋量子数（其数值为0和1）。若分子中没有未配对的电子，即S=0, 则2S+1=1 称为单重态（Pauli)；若分子中有两个自旋平行的未配对电子，即S=1，则2S+1=3称为三重态，用T表示。 电子通常的情况下分子的电子处于最低的能级状态（大多数有机物的分子的基态是处于单重态的）。用S0表示。若分子受激发，其电子从基态的电子能级跃迁到较高的电子能级，即激发态，用S1, S2……表示。 （一）荧光和磷光的产生 处于分子基态单重态中的电子对，其自旋方向相反，当分子吸收能量，若电子在跃迁过程中不发生自旋方向的改变，通常跃迁至第一激发态单重态轨道上，也可能跃迁至能级更高的单重态上。这种跃迁是符合光谱选律的。 如果电子在跃迁过程中还伴随着自旋方向的改变，即跃迁至第一或更高的激发三重态轨道上，这属于禁阻跃迁。 单重态与三重态的区别在于电子自旋方向不同，激发三重态具有较低能级（处于分立轨道上的非成对电子，平行自旋要比成对自旋更稳定些－洪特规则） 。 基态：电子自旋配对， 多重度=2s+1=1，为单 重态，以S0表示。 激发单重态：分子吸收能 量，电子自旋仍然配对， 为单重态，称为激发单 重态，以S1，S2…表示 激发三重态：分子吸收能 量，电子自旋不再配对， 为三重态，称为激发三 重态，以T1，T2….表示。 三重态能级低于单重态（Hund规则） 在单重激发态中，两个电子平行自旋，单重态分子具有抗磁性，其激发态的平均寿命大约为10-8s，而三重态分子具有顺磁性，其激发态的平均寿命为10-4 ~ 1s以上（通常用S和T分别表示单重态和三重态）。 处于激发态的电子，通常以辐射跃迁方式或无辐射跃迁方式再回到基态。辐射跃迁主要涉及到荧光、延迟荧光或磷光的发射；无辐射跃迁则是指以热的形式辐射其多余的能量，包括振动弛豫（VR）、内部转移（IR）、系间窜跃（IX）及外部转移（EC）等，各种跃迁方式发生的可能性及程度，与荧光物质本身的结构及激发时的物理和化学环境等因素有关。 下面结合荧光和磷光的产生过程，进一步说明各种能量传递方式在其中所起的作用。 设处于基态单重态中的电子吸收波长为λ1和λ2的辐射光之后，分别激发至第二单重态S2及第一单重态S1。 去活化过程（Deactivation） 处于激发态分子不稳定，通过辐射或非辐射跃迁等去活化过程返回至基态 。这些过程包括： 振动弛豫（Vibrational Relaxation, VR）它是指 在同一电子能级中，电子由高振动能级转至低振动能级，而将多余的能量以热的形式发出。发生振动弛豫的时间为10-12s数量级。 S0 S2 S1 T1 吸光?1 吸光?2 振动弛豫 荧光、磷光 能级图 → 振动弛豫 内转换（Internal Conversion，IC） 当两个电子能级非常靠近以至其振动能级有重叠时，常发生电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级。右图中指出，处于高激发单重态的电子，通过内转移及振动弛豫，均跃回到第一激发单重态的最低振动能级。 S0 S2 S1 T1 吸光?1 吸光?2 内转移 荧光、磷光 能级图 荧光发射 处于第一激发单重态中的电子跃回至基态各振动能级时，将得到最大波长为λ3的荧光。注意：基态中也有振动驰豫跃迁。很明显，λ3的波长较激发波长λ1或λ2都长，而且不论电子开始被激发至什么高能级，最终将只发射出波长λ3为的荧光。荧光的产生在10-7-10-9s内完成。 S0 S2 S1 T1 吸光?1 吸光?2 荧光?3 荧