第6章外源化学高物的一般毒性作用.pptVIP

4.3 慢性毒性试验设计 慢毒试验是制定人体日允许摄入量所需的关键性资料。 4.3.1 试验动物的选择 4.3.2 试验动物的喂养环境 4.3.3 剂量的选择与分组 4.3.4 染毒途径 4.3.5 试验期限 4.3.6 观察指标 * * 4.3.1 试验动物的选择 因慢毒试验为动物的大部分生命周期甚至终身，因此只能选用生命周期较短(2~3年)的动物。又要对饲养条件、生化系统、繁殖、自发性疾病均有比较系统的了解，故传统上选用大鼠（3-4周，50-70克）、小鼠（3周，10-12 克）。 并要求品系明确一致（取决于被检物的毒作用部位及毒剂量的总的敏感性，一般选对致癌物敏感的品系），雌雄各半。 动物数量要求与亚慢性毒性试验相似。 * * 4.3.2 试验动物的喂养环境 饲养条件和饲养环境要求与亚慢性毒性试验相同，如应保证试验动物有温湿度适宜的生活环境及合理的营养。 注意动物的营养成分可影响慢毒试验的结果，如半合成饲料可增加致癌物的敏感性，黄酮类及大蒜素相反。 * * 4.3.3 剂量的选择与分组 试验分零剂量组、预期无作用剂量组、阈剂量组、发生轻微但有明确毒效应剂量组和发生明显的毒效应甚至亚致使死水平剂量组，以求量效关系。必要时加溶剂对照组。 剂量选择参考： ①亚慢毒试验结果：高剂量组为1/5-1/2阈剂量，轻微毒效应组为1/20-1/10阈剂量，慢毒阈剂量组为1/50-1/20阈剂量，预期无作用剂量组为1/10最大无作用量、1/100阈剂量或10-50倍人群实际最大摄入量。 ②急毒实验结果：高剂量组为1/10LD50，慢毒阈剂量组为1/100LD50，预期无作用剂量组为1/1000LD50。 ③美国环保局建议：0.125MTD和0.25MTD。MTD(最大耐受量):试验组动物较对照组动物体重减轻不超过10%、无死亡、无中毒症状和病理损伤的最大量。 * * 4.3.4 染毒途径 慢毒试验多采用经胃肠道与呼吸道接触。 经胃肠道接触一般将受试物与食物或饮水混合，由动物自然摄入。但若受试物有异味或易水解时可采用每日定时灌胃。 经呼吸道接触，依试验要求定每日接触时间，如为工业毒物的试验通常要求每日吸入4-6小时，如为环境污染物一般要求每日吸入8小时或更长时间。 * * 4.3.5 试验期限 其依试验的要求和实验动物种类而定。 使用大、小鼠时，工业毒理学要求6个月；食品和环境毒理学一般要求1年以上至2年。若与致癌试验结合进行，则最好长达接近动物的预期寿命，甚至终生。 有人认为大鼠90天试验即可确定慢性无作用水平；也有主张终生接触才能全面反映受试物的慢毒效应及求出阈剂量或无作用量。 * * 4.3.6 观察指标 应以亚慢毒试验的观察指标为基础，选择亚慢毒试验中已呈现有意义的变化指标。 一般常规观察指标包括肝、肾功能，健康状况、体重、血液及其它生化指标。对死亡动物及试验结束时应作病检。 为减小误差和排除漏检，应注意：试验前应对观察指标进行正常值检查，剔除差异大的动物；观察应与对照组同步进行并作对比；检测方法应稳定，并有质量控制；应在不同间隔（于6、12、18个月）处死部分动物检测，以了解是否有进行性和可逆性变化。 * * 4.4 亚慢性、慢性毒性作用评价 了解受试物毒性的大小及靶器官并找出敏感的毒效应指标，即最早出现在最低剂量组并与对照组比较差异有显著性的毒效应指标。 4.4.1 基本评价参数 4.4.2 亚慢毒资料评价 4.4.3 慢毒资料评价 4.4.4 综合结论 * * 4.4.1 基本评价参数 阈剂量是敏感毒效应指标出现改变的最小剂量（Limch)。用最低有害作用水平（ lowest observed adverse effect level，LOAEL）或最小作用量（MED）表达。 最大无作用量（maximal no-effect dose）是不引起机体某种毒效应的最大剂量。用无明显作用水平（NOEL）或无明显有害水平（NOAEL）表达。 LOAEL或NOAEL是评价化学物对机体损害的主要指标，但应注明动物、试验条件及观察指标。以此为基本可制定化学物的接触极限。 * * 4.4.2 亚慢毒资料评价 我国《食品安全性毒理学评价程序》中规定：亚慢毒试验中， 最大无作用剂量小于或等于人可能摄入量的100倍，则表示毒性很强，应放弃该化学物的使用； 若最大无作用剂量在100-300倍之间，可进行慢毒试验； 若大于或等于300倍，则不必进行慢毒试验，可直接进行毒性评价。 * * 4.4.3 慢毒资料评价 如慢毒试验中未发现致癌性： 最大无作用剂量小于或等于人群的可能摄入量的50倍，表示毒性较强，应放弃该化学物的使用； 最大无作用剂量在50-100倍之间者，需相关专家共同评议； 最大无作用剂量大于或等于100倍者，则可考虑允许使用于食品，并制订卫生