反相高效液相色谱多台阶梯度分离淫羊藿中黄酮类-西北大学学报.PDF

西北大学学报( 自然科学网络版) 2006 年 7 月，第 4 卷，第 4 期 Science Journal of Northwest University Online Jul.2006, Vol.4. No.4 反相高效液相色谱多台阶梯度分离淫羊藿中黄酮 类化合物的优化研究 王丽霞, 耿信笃 （西北大学 现代分离科学研究所，陕西 西安，710069） 摘 要：对淫羊藿提取液的分离条件进行优化。采用一种反相高效液相色谱多台阶梯度方法对淫 羊藿提取液进行分离。该方法以乙腈-水溶液为流动相，经优化最终确定的色谱条件对淫羊藿提取 液进行分离得到 19个分离效果良好的色谱峰；用实验对此优化条件的稳定性、精密度等进行了验 证，试验结果显示了较好的预测精度和分离度。本方法分离淫羊藿提取液的分析时间短且分离度 高，显示了台阶梯度优化方法在确定色谱分离条件上的优越性。 关 键 词：淫羊藿；淫羊藿提取液；黄酮类化合物；反相高效液相色谱；梯度洗脱优化 中图分类号：O652.63 文献标识码：A 文章编号：1000-274X(2006)0225-06 淫羊藿又名仙灵脾，味辛甘，性温，入肝肾二经，具有补肾壮阳、祛风除湿、止咳平喘、益气强心等 功效[1] ；药用其全草，为中老年人肾阳虚衰常用保健药。药理研究表明，淫羊藿主要成分为淫羊藿总黄酮 [2,3] （淫羊藿甙类）和淫羊藿多糖等，还有棕桐酸、硬脂酸以及挥发油、生物碱及微量元素锰等多种物质 ， 潜在可利用的活性成分甚多。在临床研究上，淫羊藿常用于治疗骨质疏松、更年期综合症、乳房肿块、高 血压、冠心病等疾病，另外淫羊藿还具有增强免疫力、抗衰老、抗肿瘤、抗艾滋病等作用[4]，因而有着巨 大的研究和开发潜力。 反相高效液相色谱法(RP-HPLC)是分离淫羊藿黄酮类化合物的最常用方法。国内外的色谱研究者对物 质在液相色谱上的保留机理及分离条件的优化做了很多工作，国内主要是耿信笃提出了计量置换理论 [5] [6] (stoichiometric displacement theory for retention, SDT) ，国外主要是L.R.Snyder 建立了线性梯度优化方法 。 等度台阶梯度优化方法[7]是近年来用于复杂样品分离的一种有效的方法，能够给出最后的分离优化条件。 本文采用该方法对淫羊藿提取液的分离条件进行了优化，最后选用的色谱分离条件耗时短且分离度高，对 工业化规模分离纯化淫羊藿黄酮类化合物等成分有一定的参考价值。 1 实验部分 1.1 试剂与仪器 乙腈为色谱纯（Tedia 公司，美国），乙醇、甲醇等均为分析纯，水为二次蒸馏水经E-Pure 纯水器制备， 淫羊藿甙对照品购自中国药品生物制品鉴定所，淫羊藿地上部分购自陕西商县中药材采供站，为淫羊藿属 箭叶淫羊藿( Epimedium sagittatumm Maxim) 。 ________________________ 收稿日期：2005-04-26 基金项目：国家自然科学基金资助项目(No 审稿人：孙文基，西北大学生命科学院教授 LC-10Avp 高效液相色谱仪，包括 LC-10Avp 高压泵，SPD-M10Avp 二极管阵列检测器，SCL-10Avp 系统控制器，FCV-10Avp 四元低压梯度单元，DGU-14A 脱气仪，（岛津，京都，日本），CLASS-VP5.03 色谱工作站（岛津，京都，日本）， E-Pure 纯水器（Barnstead 公司，美国）。AvantiTM J-25 型离心机（Beckman